以原核表达的e病毒融合蛋白p54-ztan为抗原建立elisa方法及其在鼻咽癌诊断中的应用.pdf

及其在鼻咽癌诊断中的应用 中文摘要 中表达p54-ztaN融合蛋白，以纯化后的融合蛋白为抗原建立ELISA方法，开发 新的NPC诊断及筛查方法。 方法：自EBV阳性细胞(B95．8)中提取总RNA，经逆转录．聚合酶链反应 Western blot检测所表达的蛋白，亲和层析纯化重组蛋白；纯化的重组蛋白直接 包被酶标板，优化ELISA检测的条件，用已优化的ELISA方法对鼻咽癌病人、 正常人以及其他非鼻咽癌的头颈部肿瘤病人血清中的相应抗体进行检测，进而对 检测方法的诊断价值进行评估。 的碱基序列为接头，通过重叠区扩增基因拼接技术成功获得了BMRFl．BZLFlN 了p54-ztaN融合蛋白的表达系统E．coli SDS．PAGE显示该表达系统能高效表达出88kDa左右的融合蛋白，分子质量大小 与预期一致：经Westernblot实验证实该融合蛋白能很好地与相应抗体结合；用 亲和层析法获得了高纯度的融合蛋白； ELISA法检测放射治疗前鼻咽癌病人、 正常人以及其他非鼻咽癌的头颈部肿瘤病人血清抗体的OD450平均值分别为 1．083、0．303和0．396，放射治疗前鼻咽癌病人组血清抗体水平明显高于正常人 组以及其他非鼻咽癌的头颈部肿瘤病人组，P0．05；鼻咽癌放射治疗前组和放射 6 鼻咽癌的敏感性为86％，特异性为83％。 结论：EB病毒BMRFl，BZLFlN融合基因可在大肠杆菌中获得高效表达， 重组蛋白p54-ztaN具有免疫反应性，纯化后可用作免疫诊断抗原；建立并优化 的p54．ztaN融合蛋自作为抗原对血清中相应抗体进行检测的ELISA方法，可以 对鼻咽癌进行诊断及大规模筛查；检测鼻咽癌病人血清中p54．ztaN抗体含量可 以用于监测放射治疗效果。 关键词：EB病毒鼻咽癌BMRFlBZLFlN融合基因酶联免疫吸附 试验 7 of EBV indirectELISAbased011the fusion Development protein which in andits in E．coli the p54-ztaNexpressed application of carcinoma diagnosisnasopharyngeal Abstract constructBMRFl·BZLFlNfusion andits Objective：To gone prokaryotic and in vector it E．coil ofELISAbased expression express BL21(DE3)．Development on ofthisfusion toestablishanew for antigen protein serological NPC parameter diagnosis． Methods：TheB95-8cellswercculturedtillthe