中医药干预脉络新生血管的实验研究.pdf

摘 要 中医药干预脉络膜新生血管的实验研究 旧的】筛选出干预脉络膜新生血管(CNV)可能有效的中药，进一步研究其作 用及机理。 【方法】 第一部分：鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)法检测加减大黄廑虫丸等复方及单味 中药对CAM血管生成的影响。 第二部分：采用MTS比色法，观察不同浓度的加减大黄廑虫丸等复方及单 味中药对血管内皮生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞株(ECV一304)、 细胞增殖的影响。 第三部分iTranswell小室检测不同浓度的加减大黄廑虫丸和复方血栓通对 体外培养的ECV-304、RF／6A和CRL一2302细胞移行的影n向。 第四部分iMatrigel实验检测不同浓度的加减大黄廑虫丸和复方血栓通对体 外培养的ECV一304、RF／6A细胞内皮管腔形成的影响。 Blot和实时定量逆转录聚合酶链反应(R-T-PCR) 第五部分：运用Western 的方法，检测加减大黄廑虫丸对体外培养的RF／6A和CRL·2302细胞表达VEGF 和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白和mRNA的影响。 【结果】 第一部分：中、低浓度的加减大黄廑虫丸、复方血栓通，高、中浓度的虻虫、 地鳖虫，高、中、低浓度的水蛭，高浓度的鼠妇、蛴螬能够抑制鸡胚CAM血管 生成。 第二部分：0．05、O．1和0．2g／ml浓度的加减大黄廑虫丸对VEGF诱导的 ECV-304和CRL-2302细胞增殖都具有抑制作用；只有0．2 g／ml浓度的加减大黄廑 虫丸对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖具有抑制作用。1．5625—100mg／ml浓度的复方 125—25 血栓通对VEGF诱导的ECV-304细胞增殖具有抑制作用；0．78 mg／ml浓度的 复方血栓通对VEGF诱导的RF／6A细胞增殖具有抑制作用；1．5625—200 mg／ml浓度 的复方血栓通对VEGF诱导的CRL-2302细胞增殖具有抑制作用。 第三部分：12．5、25和50mg／ml浓度的加减大黄廑虫丸对ECV-304、RF／6A 和CRL-2302细胞移行具有抑制作用；3．125、6．25和12．5mg／ml浓度的复方血 2．5 栓通对ECV-304和CRL一2302细胞移行具有抑制作用，6．25和1 mg／ml浓度 的复方血栓通对RF／6A细胞移行具有抑制作用。且二药都随浓度增大，抑制作 用增强。 第四部分：25和50mg／ml浓度的加减大黄廑虫丸对ECV-304细胞内皮管腔 形成具有抑制作用，12．5、25和50 mg／ml浓度的加减大黄廑虫丸对RF／6A细胞 内皮管腔形成具有抑制作用；0．390625、0．78125和1．5625 mg／ml浓度的复方血 栓通对ECV-304和RF／6A细胞内皮管腔形成都具有抑制作用。且二药都随浓度 增大，抑制作用增强。 第五部分：一定浓度的加减大黄廑虫丸具有抑制RF／6A和CRL-2302细胞 VEGF和MMP-2蛋白和mRNA表达的作用。 【结论】加减大黄磨虫丸和复方血栓通具有明显抑制血管生成的作用；可能通过 抑制脉络膜血管内皮细胞增殖、移行和管腔形成，以及抑制RPE细胞增殖、移 行的途径抑制CNV形成；加减大黄廑虫丸抑制脉络膜血管内皮细胞和RPE细胞 VEGF和MMP-2的表达可能是其重要的作用机理之一。 I关键词】中医药；加减大黄廑虫丸；脉络膜新生血管(CNV)；血管生成；绒 毛尿囊膜(CAM)；增殖；移行；管腔形成；人脐静脉内皮细胞株(ECV·304)； 猴脉络膜．视网膜内皮细胞(RF／6A)