国内重点实的验室分子生物学实验方法汇总实验室常用实验方法.pdf

国内重点实验室分子生物学实验方法汇总 国国内内重重点点实实验验室室分分子子生生物物学学实实验验方方法法汇汇总总 PCR 2 RT-PCR 4 琼脂糖核酸电泳6 胶回收纯化DNA 6 大肠杆菌质粒DNA 的提取（碱裂解法）7 乙醇沉淀DNA 8 酶 切 8 连 接 8 感受态细胞的制备9 转 化 10 重组子的筛选和鉴定10 真核细胞的转染 11 转染细胞的稳定筛选 11 重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量 12 肿瘤细胞体外传代培养及保种13 肿瘤动物模型的建立14 小鼠尾静脉注射方法14 肿瘤蛋白疫苗预防性动物实验14 人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养14 实验动物免疫方案15 血清制备 16 ELISA 16 血清学筛选克隆新抗原/新基因 17 ELISPOT 20 藻酸盐包裹实验21 重组腺病毒构建，扩增及纯化基本技术操作 21 （细菌内同源重组AdEasy System） 21 组织病理技术26 免疫组化染色27 流式细胞仪常用的几种检测方法 29 Western Blot( 免疫印迹法) 34 PVDF 膜上蛋白的可逆染色 37 人肿瘤抗原的识别与鉴定39 －免疫沉淀实验流程39 蛋白质组实验流程41 SDS胶染色 44 数据库搜索(Databases search) 45 主要的公共数据库及网址46 蛋白质的序列分析流程48 聚丙烯酰胺凝胶的配制49 双向电泳常用溶液配方51 分子生物学常用溶液配制53 1 生物秀论坛网上搜集，更多精彩内容请访问/bbs/index.php 总RNA的提取（Trizol法提取） 总总RRNNAA的的提提取取（（TTrriizzooll法法提提取取）） 在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存， 则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将储 存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻， 以避免RNase 的作用。 1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml Trizol 试剂对组织进行裂解；提 6 取细胞RNA 时，先离心沉淀细胞，每5-10 ╳10 个细胞加1ml Trizol 后，反 复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞； 2. 将上述组织或细胞的Trizol 裂解液转入EP 管中,在室温15~30C下放置5 分钟； 3. 在上述EP 管中，按照每1ml TRIZOL 加0.2ml 氯仿的量加入氯仿，盖上EP 管盖子，在手中用力震荡15 秒，在室温下（15℃～30℃）放置2～3 分钟后， 12000g（