09生药学第3章.ppt

第三章?:??生药的有效性评价 生药的有效性评价 有效性评价 第一节 生药化学成分的分析方法 分析方法 第二节 定量分析方法 的方法学验证 　 定量分析方法验证的目的是证明采用的含量测定方法适合于相应分析要求，在进行定量分析方法学研究或起草药品质量标准时，分析方法需经验证。 　 验证内容有： 线性、范围、专属性、准确度、精密度（包括重复性和重现性）、稳定性、检测限、定量限和耐用性等。 1.线性 线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物质浓度直接呈正比关系的程度。线性关系的数据包括相关系数、回归方程和线性图。 用最小二乘法进行线性回归 ，回归方程的相关系数 r 越接近于 1 ，表明线性关系越好。 线性回归图例 2.范围 范围系指能达到一定精密度、准确度和线性时，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 　 范围应根据分析方法的具体应用和线性、准确度、精密度结果及要求确定。对于有毒的、具特殊功效或药理作用的成分，其范围应大于被限定含量的区间。 3.专属性 专属性系指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在时，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别试验、限量检查和含量测定等方法均应考察专属性。 1.鉴别试验——阴性不干扰试验 应能与可能共存的物质或结构相似化合物区分。不含被测成分的样品，以及结构相似或组分中的有关化合物，均应呈负反应。 2.含量测定和限量检查——以不含被测组分的供试品试验，说明方法的专属性。 4.准确度 准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用加样回收率 ( ％ ) 表示。 应报告供试品取样量、供试品中含有量、对照品加入量、测定结果和回收率 ( ％ ) 计算值，以及回收率 ( ％ ) 的相对标准偏差 (RSD) 或可信限。 RSD= ×100% = / ×100% 加样回收率的计算 5.精密度 精密度是指在规定的测试条件下（n≥5)，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间接近的程度。一般用相对标准偏差 RSD表示。精密度报告的数据应包括平均值、可信限及相对标准偏差。 各自要求 中间精密度：为了考察随机变动因素对精密度的影响，需设计进行中间精密度试验，变动因素包括不同日期、不同分析人员和不同设备。 重复性：在同一条件下对同一批样品，从样品供试品液制备开始，制备至少六份以上供试品溶液 ( 即 n ≥ 6), 或设计 3 个不同浓度，每个浓度各分别制备 3 份供试溶液，进行测定，计算其含量的平均值和相对标准偏差 (RSD) 。 RSD 一般应根据样品含量高低、含量测定方法和繁简进行制订，如含量很低一般不大于 5 ％；如含量较高，则应从严要求。 重现性 ：当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。 6.稳定性 稳定性是指在规定的测试条件下（n≥6)，短时间内考察待测组分的稳定性。（如时间间隔可取1h、2h、3h等进行） 7.检测限（LOD) 检测限是指试样中被测物质能被检测出的最低浓度或量。检测限是一种限度检验效能指标，它从灵敏度和噪音的大小这两方面来反映检测器的性能。常用信噪比法测定,一般以 S / N ＝ 2 或 S / N ＝ 3 时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 检测限的报告数据应附图谱，说明测试过程和检测限结果。 8.定量限(LOQ) 定量限是指样品中被测物质能被定量测定的最低量，其测定结果应具有一定准确度和精密度, 其值反映检测器的性能。常用信噪比法测定, 一般以 S / N ＝ 10 时相应的浓度或注入仪器的量进行确定。 9.耐用性 耐用性系指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法用于常规检验提供依据。 典型的变动因素有：被测溶液的稳定性，样品提取次数、时间等。具体依试验设计而定（见书）。 经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以确保方法有效。 第三节 生药中各类成分及定性定量分析 一、黄酮类化合物 根据中央三碳链的氧化程度，B-环连接位置（2-或3-位）以及三碳链是否构成环状等特点，将主要的天然黄酮类化合物分类如下： 含黄酮类化合物的生药： 黄岑、槐花、陈皮、葛根、野菊花、甘草、水飞蓟、银杏叶、淫羊藿、芫花、射干。 性质 性状 颜色与荧光 旋光性 溶解性 酸碱性 显色反应 性质 黄酮类化合物多为结晶性固体，