LCMSMS定量分析优化技巧.pdf

LC-MS/MS 定量分析优化技巧 美国应用生物系统中国公司 应用技术服务部 Opportunities in the Services and System Solutions Market 样品制备方面： ● 样品处理的好坏直接关系到整个LC-MS分析的成败，必须要 有成熟规范的样品制备方法。 ● 样品预处理各步不能随意省略，如萃取、分离、去盐等。某 些化合物必须化学衍生化以适应LC-MS 要求，如磷酸酯水 解。 ● 若MS信号实在太低，考虑更换样品处理方法。 ● 浓度非常低的样品不能保存太长时间，容器吸附、分解等原 因使样品浓度降低，标准品工作液现配现用。 2 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 离子化方法选择：根据样品性质确定离子化方式 适合ESI(IS)的样品类型： – 高极性化合物、蛋白质、肽类、低聚核苷酸等生物分子； – 胺类、季铵盐等； – 含杂原子化合物如氨基甲酸酯等 适合APCI的样品类型： – 弱极性/ 中等极性的小分子，如脂肪酸，邻苯二甲酸等 – 含杂原子化合物如氨基甲酸酯、脲等 ESI不适合的化合物：极端非极性化合物如苯等； APCI不适合的化合物：非挥发性样品；热稳定性差的样品 3 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market 离子化方法选择： ● 碱性化合物宜用正离子方式 ● 酸性化合物宜用负离子方式 ● 如未知,可能正负都要做 ● 有些化合物正、负模式都出峰，选择灵敏度高的方式，不明确的 优先试用正离子方式 4 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market LC条件的选择： ● 根据化合物类型选择流动相组成，甲醇-水，乙腈-水或甲醇-乙 腈-水 ● 某些化合物只有某种流动相体系才出峰 ● 一般正离子方式用甲醇，负离子方式用乙腈好些 ● 通常有机相比例高些好 ● 梯度的设定：梯度变化太快对离子化效率影响很大，相应源参 数也应该改变，所以恒定比例流动相能满足分离分析要求时， 尽量不用梯度，尤其定量分析时 5 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market LC条件的选择： ● 流动相中加入甲酸、乙酸铵等可提高正离子化效率 ● 是否加酸不是绝对的，具体应根据LC的分离情况、样品在酸性 条件下的稳定性等决定 + + ● 通常pH值低时，[M+H] 比率高； pH值高时，[M+Na] 、 [M+K] + ，或[M+NH ] + 比率高 4 6 Date | AB CONFIDENTIAL © 2006 Applied Biosystems Opportunities in the Services and System Solutions Market LC条件的选择 ● 定性分析时，有时加一些NH4+ ，Li +等，可帮助确定判断母离 子，对碎片较少的化合物，可以增加其质谱特征性，但会使生 物大分子的质谱复杂化。 ● 水的选择：娃哈哈纯净水比普通蒸