动物组织培养细胞培养基本条件.ppt

超净工作台 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养　　　　　　皿和培养板等表面消毒 滤 器 培养瓶 常用玻璃器皿清洗 浸泡（自来水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（24小时）、 流水冲洗、蒸溜水浸泡和冲洗、50℃烘干 清洁液的配制 CO2培养箱 顯微鏡 培养细胞生长的条件 1 细胞的营养需要 2 细胞的生存环境 温度: 37 ℃，O2 　CO2: 5%，CO2 +H2O ← →H2CO3 ← →H+ + HCO3- pH: 7.2-7.4 渗透压 3 无污染 4 无毒 细胞培养用液的配制 水：新鲜配置的三蒸水或去离子水 平衡盐溶液：无Ca2+、Mg2+的缓冲液 PBS：NaCl 8.0 g KCl 0.2 g Na2HPO4.H2O 1.56 g KH2PO4 0.20 加水至1000 ml 消化液： 胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨架，从而使细胞分离。 胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定限度会损伤细胞。 胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无Ca2+、Mg2+的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25％ 。用滤器过滤除菌。 胰蛋白酶液消化时间：2-10分钟。 用含血清培养液终止其对细胞的消化作用 培养基： 培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基和合成培养基。 * 细胞培养的基本条件 无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器， 　　　　　洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外 　　　　　灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素 细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， 　　　　　　　CO2培养箱，培养基，血清 细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器，高 　　　　　　　速离心机，移液器 细胞保存条件：液氮罐 实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全 净化工作室 ???????????????????????????????????????????????????????????????? 　15 　NA 　60,000 　10,500,000 　300,000 　10 　500 　20,000 　3,500,000 　100,000 　3 　100 　2,000 　350,000 　10,000 　1 　5 　0 　3,500 　100 沉降菌/皿 浮游菌/立方 　≥5um 　≥0.5um 尘粒最大允许数 　尘粒最大允许数/立方米 　洁净度级别 ------ 我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准 ------- 风淋室:　　风淋室是生物洁净室的理想配套设备，它不仅可以清除人体和物品表面附着的尘埃，减少带入洁净室的灰尘量，而且兼有气闸室的功能，可防止非洁净空气的侵入。风淋室的板壁采用轻质隔热夹芯钢板，吹淋板采用进口不锈钢制作，吹淋口方向可调，风淋时间可在30-99秒间的调整。风淋室可以配合加热器，冬天可以加热，温度可调，一般控制温度在30-35℃较为适宜。 传递窗:　　该装置是一种洁净室的辅助设备，主要用于洁净区与洁净区，洁净区与非洁净区之间小件物品的传递，以减少洁净室的开门次数，把对洁净区的污染降低到最低程度。　　PB系列传递窗按用途分为标准型和生物洁净型两种。（后者带空气自净装置）按门互锁形式分为机械互锁和电子互锁两种外壳按材料分为彩钢板型、薄钢板喷塑型和全不锈钢型三种通用型尺寸如下表所列，特殊规格按用户要求制作。 高效过滤器: 　　高效过滤器是用超细玻璃纤维纸作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合金框、木框及镀锌钢板框组合而成。? ??? 特点：具有低阻高效、轻质、容尘量大等特点，层高的要求，缩小净化设备静压箱体积等优点。 ??? 适用于常温常压常湿条件下环境空气的净化，尤其适用于需要高效空气过滤器覆盖率高的净化厂房。 洁净层流罩: ?? 技术性能参数：????? (1)净化等级：100级(美国联邦标准209E)????? (2)平均风速：0.25～0.45m/s(可调)?? (3)噪音：≤62dB(A)?? (4)电源：220V/50HZ?? 层流罩是可提供局部高洁净环境的空气净化设备。它主要由箱体、风机。初效空气过滤器、高效空气过滤器、阻尼层、灯具