复方苦参注射液联合小剂量5-氟尿嘧啶对胃癌SGC-7901细胞血管内皮生长因子及趋化因子受体表达影响.pdf

血管内皮生长因子及趋化因子受体表达的影响 杨勤张亚声 上海交通大学附属第一人民医院中医科上海(200080) 胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国，其五年生存率仅为24％。局部复发和转移是死亡的主 要原因。新生血管生长是肿瘤生长和转移的关键环节，抑制肿瘤新生血管生长已经成为恶性肿瘤治 疗的热点。节拍化疗(metronomic ehemothempy)是新兴的一种抗肿瘤血管生成的方法，即小剂量 化疗药物(通常为常规剂量的1／10～1／3)持续给药，其相对于常规化疗，即最大耐受剂量化疗 (maximumtolerateddose，MID)的优点是耐药现象少，毒副反应小，患者依从性高。但肿瘤血管 的生成是多种细胞因子综合作用的复杂过程，单纯依靠节拍化疗来达到抑制血管生成的目的是远远 不够的。因此，多种治疗手段联合应用，多靶点作用于肿瘤血管生成步骤，成为目前肿瘤治疗的趋 势。在长期的临床实践及实验研究中，人们逐渐发现化疗与中医药联合应用能提高临床疗效。根 据众多的临床报道，复方苦参注射液(matrine injection，MI)联合化疗治疗各种恶性肿瘤已经取 得了较好的疗效，它能改善化疗引起的疼痛、发热、消化道反应、乏力，提高免疫，抑制肿瘤生 长，延长患者生存期，提高患者生活质量。笔者研究应用MI联合小剂量5．Fu对胃癌SGC．7901 endothelial 细胞中血管内皮生长因子(vascular growth chemokine4，CXCR4)表达的影响，初步探讨MI对于化疗减毒增效的作用及抗肿瘤血管 receptor 生成的机制。 1．材料与方法 1．1 实验材料人胃癌细胞系SGC．7901由上海市第一人民医院消化科实验室保存，DMEM细 箱(Forma Franklintak@s 生物有限公司，所用Prim@r序列以专业引物设计软件Premier 引物由上海瑞基生物科技有限公司合成。 1．2实验方法 1．2．1 验时取对数生长期细胞。 养板中，200ul／孔。当细胞生长至70％．80％融合时，换成无血清培养液继续培养24h，使细胞同步于 联合用药组(两药合用的比例为(V：V)为l：1)，每组每个浓度各设4个平行孔。各组细胞分别 ．．．．—292．．．．． rate，IR)：Ⅱb 验组的吸光度值(A450值)。本实验重复3次，按公式计算细胞生长抑制率(inhibition MI最佳作用浓度进行后续实验。以后实验参照此浓度进行分组：空白对照组；5．Fu 20ug／ml组(F 组)；MI40ul／ml组(M组)；5．Fu40ul／ml组(联用组)。 20ug／ml+MI 细胞上清液，加入无血清培养液培养24h后，按上述方法分组。培养24h后，细胞弃上清液，以冷 值。实验重复3次。 表l引物序列 基因名称 上游引物 下游引物 弓I物长度(bp) CXCR45’．GAGAAGCArGACGGACGGACA5’．GCAAAGATGAAGTCGGGAAT302 A(订’A．3’ AG．3’ VEGFl65 300 VEGFl21 Z42 5’．CCAAGGCCAACCGCGAGA5’一AGGG聪CArl3GTGGTGCCGCC592 B-actin AGATGA AGAC．3’ C．3’ 1．2．4免疫荧光化学法检测CXCR4蛋白表达按实验分组制作细胞爬片，加药