大肠杆菌的检测.docVIP

致病性大肠杆菌的检验 定义：致病性大肠杆菌是指埃希氏菌属中能引起动物和人致病血清型的细菌。 一 器皿和试剂及实验动物：培养皿，试管，试管架，灭菌移液管，无菌生理盐水 乳糖胆盐发酵管，伊红美兰培养基，乳糖发酵管，营养肉汤革兰氏染液 光学显微镜，实验动物。 二，病料的采集：无菌条件下取动物的心血，脾脏，肺脏，肝脏，在实验室内的无菌环境中，将脏器表面进行无菌处理后，取内脏里面的内容物接种于乳糖胆盐发酵管 伊红美兰培养基送37?C培养18-24h后观察，乳糖胆盐发酵管产酸产气，伊红美兰培养基长出带金属光泽的黑色菌落，挑取培养物涂片染色，镜检呈革兰氏阴性小杆菌就可进行复发酵。 三，复发酵和增菌： 1，将乳糖胆盐发酵管 伊红美兰培养基的培养物分别接种于乳糖发酵管内送37?C培养18-24h后观察，乳糖发酵管产酸即为阳性。有待进一步做生化和血清学实验验证。 2．将乳糖胆盐发酵管 伊红美兰培养基的培养物接种于营养肉汤内送37?C培养18-24h后备用。 四，攻毒实验：取增菌培养物0.3-0.5ML注射小鸡于的皮下,观察小鸡死亡的时间；(正常死亡的时间应在24-48h内,死亡数量应超过半数;如在24h内死亡说明毒力强或注射量太大;如超过48h不死亡或死亡不超过半数,说明该菌株毒力弱或没有致病性。) 水质大肠菌群快速检验纸片 ????? ????? 大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被广泛应用于食品卫生工作中。大肠菌群多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，大肠菌群数的高低，表明了食品及食品生产过程中受污染的程度。本品可用于检测水源水中的大肠菌群数，与国标法相对应，将原来几步的试验简化为一步，时间由一个星期左右缩短为十几个小时，而且省去了制备培养基和清洗器皿的麻烦，非常适合于生产企业自检和卫生检验部门使用 。 　 方法提要：将不同量的水样接种到含有乳糖、显色剂和选择性培养基的快速检验纸片上，经培养后能够在纸片上生长并发酵乳糖产酸的即为大肠菌群阳性，根据阳性反应结果可测出原水样中大肠菌群的 MPN（最可能数）值。 　 实验结果图例： 　 　 使用方法：1.用灭菌吸管吸取10mL水样插入装有大纸片的塑料薄膜袋中，均匀涂布，共做5个重复；分别取1mL水样加到小纸片中，共接5个重复；另取1mL水样加到9mL无菌水中混匀，用1mL灭菌吸管分别吸取1mL（即0.1mL水样）,加到最后5片小纸片中。2.将接种好的纸片平放于培养箱中，36±1℃培养15小时。3.观察每片颜色变化，若纸片保持紫蓝色不变为大肠菌群阴性，纸片变黄或在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。4.根据每个稀释度的阳性反应纸片数，查MPN表（附表1）可得出水样中大肠菌群得MPN值 ?保存条件：本品需存在 10 ℃ 以下冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后，未用的纸片要放回铝箔袋中重新封好，放到冰箱中，一个月内用完。 　 1?? （水质）大肠菌群（MPN）检索表 （总接种量55.5mL，其中5份10mL水样，5份1mL水样，5份0.1mL水样） 　 MPN附表： 接种量/ mL MPN/100mL 接种量/ mL MPN/100mL 10 1 0.1 10 1 0.1 4 4 0 34 5 2 0 49 4 4 1 40 5 2 1 70 4 4 2 47 5 2 2 94 4 4 3 54 5 2 3 120 4 4 4 62 5 2 4 150 4 4 5 69 5 2 5 180 4 5 0 41 5 3 0 79 4 5 1 48 5 3 1 110 4 5 2 56 5 3 2 140 4 5 3 64 5 3 3 180 4 5 4 72 5 3 4 210 4 5 5 81 5 3 5 250 5 0 0 23 5 4 0 130 5 0 1 31 5 4 1 170 5 0 2 43 5 4 2 220 5 0 3 58 5 4 3 280 5 0 4 76 5 4 4 350 5 0 5 95 5 4 5 430 5 1 0 33 5 5 0 240 5 1 1 46 5 5 1 350 5 1 2 63 5 5 2 540 5 1 3 84 5 5 3 920 5 1 4 110 5 5 4