Mac1在细胞内走向的直视研究.pdfVIP

中国科学C辑生命科学2004，34(3)：263—270 263 Mac．1在细胞内走向的直视研究术 严 鸣鲈4 毛积芳② 韦 毅③钟纪根①杨生生②徐仁宝① (①第二军医大学基础医学部病理生理学教研室，上海200433；②第二军医大学基础医学 部生化与分子生物学教研室，上海200433；③复旦大学生命科学院，上海200433) 摘要 分别构建荧光蛋白(FP，fluorescence lb，CDl8)融合蛋 protein)-与Mac—l的两个亚基(CDl fused withfluorescence Mac．1．FP(Mac．1 不到Mac一1，PMA活化后1h，胞膜上可见CDllb—PE和YFP—CDl8群集，2h后内吞，内吞后 lb—PE与 YFP—CDl8的荧光减弱，提示Mac．1有部分降解；24h后PMA再次活化，部分CDl Mac一1．FP．CHO细胞作用后，4h内粘附增加，同时伴有Mac．1．FP的群集，8h后粘附减少，同时伴 作用后也可能出现内吞并降解．由以上结果可以得出结论，Mac一1活化后的走向是由胞浆内转位 到质膜上，然后内吞，内吞后被降解或可被再利用，与此同时粘附活性亦发生相应的变化，提示 受体介导性内吞是白细胞粘附活性降低的重要机制之一． Mac．1PMA 关键词 ICAM-1走向 differentiationassocla— Mac一1(macrophageantigen 后Mac一1如何参与粘附的研究己相当深入，但是关于 tedwith three fuction)，又称 complementreceptor Mac一1在白细胞脱粘附中的作用及其机制则研究得还 CDllb／CDl8，为位于白细胞(巨噬细胞和中性粒细胞) 很少；对于Mac．1的贮存、转位、变构的过程，尚缺 表面的整合素家族粘附分子之一，是白细胞游走、趋 乏在一个细胞内对其全过程动态定位定量的研究；对 化、吞噬的基础，在机体防御作用及免疫反应过程中 不同的激动剂引起的Mac—l的活化过程，还只是一 起着极为重要的作用【1J．迄今为止，尽管白细胞活化 个笼统的模式【2’3J．以往文献上研究Mac。1的贮存、转 2003．08．15收稿，2004．02—25收修改稿 +国家自然科学基金资助项目(批准号30000068) ”8 E—mail：myan00@hotmail．corn SCIENCEINCHINASer．CLifeSciences 264 中国科学C辑生命科学 第34卷 位以及内吞的方法主要采用的是抗体标记Mac一1，用然后孵育1，2，4，8，16，24与36h(8，16，24与36h组， 流式细胞术测定或免疫组化技术显微镜下直接观察 孵育结束前4h加入终浓度100 gg／mL的放线菌酮)， Mac一1的细胞内分布，其缺点是不可能在单细胞、活 细胞内动态连续地观察[4,51．本研究在已构建成功荧光之后，对照组与实验组均于孵育结束前30 蛋白(FP，fluorescence protein)与Mac．1的两个亚基 (CDllb，CDl8)融合蛋白表达载体，并经鉴定pYFP—