Pichia stipitis木糖醇脱氢酶基因XYL2在酿酒酵母中的表达.pdf

维普资讯 第 22卷第 2期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 VO1．22 NO．2 2003年 3月 JournalofWuxiUniversityofLightIndustry Mar． 2003 文章编号 ：1009—038X{2003}02—0026—04 Pichiastipitis木糖醇脱氢酶基 因XYL2在 酿酒酵母中的表达 陈叶福， 王正祥， 方慧英， 诸 葛健 (江南大学 生物工程学院，江苏 无锡 214036) 摘 要 ：通过 PCR方法克隆得到树干毕赤氏酵母木糖醇脱氢酶(XDH)基因XYL2．将该基因连入 酵母表达载体 pYX212的强启动子磷酸丙糖异构酶 (TPI)启动子下，得 到融合表达载体 pYX— XYL2．通过 电转化方法将 pYX—XYL2转入酿 酒酵母 Saccharomycescerevsi口eW303—1A 中。酶活测 定表明在酿酒酵母 中树干毕赤 氏酵母木糖醇脱氢酶基 因XYL2得到活性表达 。酿酒酵母转化子粗 酶液 中木糖醇脱氢酶比活为每毫克蛋 白0．6U左右，约为供体 菌的2．4倍 ．与基 因供体 菌不 同．木 糖醇脱氢酶基因在酿酒酵母 中表达不需木糖诱导，为组成型表达 ． 关键词：树干毕赤 氏酵母 ；木糖醇脱氢酶基因XYL2；酿酒酵母 ；基因表达 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A ExpressionofPichiastipitis XylitolDehydrOgenaseGeneXYL2 in Saccharomycescerevisiae CHEN Ye—fu， WANG Zheng—xiang， FANG Hui—ying， ZHUGEJian (SchoolofBiotechnology，SouthernYang~eUniversity，Wuxi214036，China) Abstract：PichiastipitisXylitoldehydrogenase(XDH)GeneXYL2wasamplifiedbyPCR．The XYL2genewereplacedunderthetriosephosphateisomerase(TPI)promoterofyeastvectorpYX212 tOproducethefusionexpressionvectorpYX—XYL2．pYX—XYL2wastransformedinto Saccharomyces cerevisiaeW 303—1A byelectroporation．TransformantsofS．cerevisiaecontainingXYL2ofP ．stipi— tissynthesizeanactiveXDH．SpecificXDH activitiesoftwotransformantswere0．59U／mgprotein and0．66u／mgproteinrespectively，whichweremorethan2．4timesofthatofP．stipitsCBS5773 stain．Differentlyfrom P ．stipitsCBS5773，theXYL2inS．cerevisiaetransformantsexpressedcon— stitutivelyanddidnotneedxyloseforinduction． Keywords：Pichia stipitis；xylitoldehydrogenasegeneXYL2；Saccharomycescerevisiae；geneex— pression 木质纤维素类物质是地球上最主要 的可再生 石油 日益枯竭的