减毒鼠伤寒沙门氏菌介导真核表达质粒在鸡体内分布表达.pdfVIP

569 家禽生产与禽病防治专题 o T040038 减毒鼠伤寒沙门氏菌介导真核表达质粒在鸡体内的 分布与表达 李银聚王晓利程相朝 张春杰 昊庭才杨宁宁 (河南科技大学动物科技学院，河南洛阳471003) 引言 沙门氏菌是一种细胞内侵袭菌，通过基因缺失方法构建的减毒的沙门氏菌，能够保持良好的侵袭力， 但降低了对动物的致病性，目前已用于新型DNA疫苗和活性蛋白基因载体的研究。为探讨减毒鼠伤寒 沙门氏菌作为活性蛋白基因转移活载体的可行性，本实验将携带人组织型纤溶酶原激活剂真核表达质粒 SLl344，经静脉注射和口服途径感染鸡体，以阐明减毒鼠伤寒沙门氏菌介 的减毒鼠伤寒沙门氏菌Acrp 导的外源基因在鸡体内的分布与表达情况。 材料方法 SLl344于含有卡那霉素的培 将携带真核表达质粒pEGFP-N1．apo．tPA的减毒鼠伤寒沙门氏菌△crp 养基中扩大培养，菌体用生理盐水重悬2次以除去菌体毒素，生理盐水定容，平板计数法计数。经饮用 和翅下静脉注射分别转染初产蛋鸡。注射或饮用后每隔2d，随机剖检实验用鸡2只，无菌取腿肌、肝脏、 脾脏、肾脏、十二指肠、输卵管、气管、心脏等组织，研碎匀浆取上清接种在含有1％麦芽糖的麦康凯 琼脂培养基上，37℃培养18。24h，挑取菌落，血清型鉴定是否是鼠伤寒沙门氏菌，PCR方法鉴定是否为 缺失株，组织RT-PCR和荧光镜检以确证质粒表达情况。 结果 重组菌注射后的第3天和饮用后第5天，在所检组织中，肝脏、脾脏、肾脏和十二指肠检测到有减毒 沙门氏菌存在。注射或饮用后第8～12天，肝脏和十二指肠有转录的目的RNA，且有荧光蛋白表达。 讨论 减毒沙门氏菌可通过静脉或肌肉注射以及口服或鼻黏膜等途径感染动物机体，携带并在体内表达外 源基因。鼠伤寒沙门氏菌对雏鸡的感染率很高，成年鸡也是鼠伤寒沙门氏菌适宜的宿主。口服感染的沙 门氏菌在肠道中通过淋巴液到达肠系膜中的肠相关淋巴样组织，经胸导管进入血液，因此，经静脉注射 较口服感染途径在组织中定植要早2。3d，且以肝、脾、肾和十二指肠等组织器官为主。 由于减毒沙门氏菌携带真核表达质粒在鸡体内属非整合表达，质粒的稳定存在依赖于一定的外界选 择压力，因此实验中每隔3d注射质粒中抗性选择的卡那霉素，可使质粒在细菌传代中不至于较快丢失， 并保证质粒持续复制。 参考文献(略)