Chiral Method Development.ppt

Chiral Chromatographic Method Development 1.Chiral Chromatographic Analysis 1.1 Chiral Analytical Object Starting materials Intermediates Final product 1.2 Chromatographic Chiral Method HPLC ：极性大，非挥发性，热稳定性差的样品 GC：有一定的挥发性，热稳定性好的样品 SFC：分析速度快，时间短，消耗溶剂少，在进行柱筛选和制备分离方面有很大优势 1.3 Chromatographic Chiral Stationary Phase (CSP) Class of the CSPs  1.4 Theory of the Chiral Selectivity of the CSPs  Hydrophobic Interaction 耐压 (MPa)：0～10MPa 温度范围(℃)：10 ℃ ～40 ℃ pH范围：2 ～8 Agilent GC Chiral Column Normal Phase Mobile phase A: Hexane/Heptane Mobile phase B: Methanol/Ethanol/Isopropanol Acidic additive : TFA/Acetic acid ≤0.5% Basic additive: TEA/DEA ≤0.5% 涂覆型的手性色谱柱下列溶剂决不允许使用，包括样品溶剂：二甲基甲酰胺、DMSO、二噁烷、甲苯、三氟醋酸、氯仿、氯化甲烷、丙酮和乙酸乙酯等 Reverse Phase Moblie phase for IA/IB/IC/QN-AX/QD-AX/ Chirobiotic Columns MTBE/Heptane/Hexane/Toluene/DCM/Chloroform/ Ethyl acetate/Ethanol/Isopropanol/THF/Acetone/1,4-dioxane The proper acidic or basic additive will improve the resolution and the peak shape. Generally, the better resolution could be obtained when the column oven was decreased, but the peaks would be more broad and tailed. 升温程序：恒温/近似恒温的缓慢升温 分流比：分流要比大一些 一般首选正相，首选正己烷/乙醇 建议先采用高比例的洗脱剂将样品中所有组分冲出，然后再降低洗脱剂的浓度。例如：70%B—50%B—30%B—10%B。尤其在样品组分复杂，纯度不高或化合物极性较大时。 当化合物出峰比较难洗脱，或在正相中难以得到理想的峰形时，改为反相进行尝试。 如果尝试了一根纤维素的柱子，分离效果比较差时，可以优先考虑尝试淀粉的柱子。 如果使用甲醇/乙醇或异丙醇的组合，必须保证甲醇＜乙醇/异丙醇（并且甲醇含量不宜超过8%）。 样品一般用烷烃/醇进行溶解，若很难溶解，可以使用键合型色谱柱，或尝试反相条件。 反相色谱中，建议优先尝试的水相与有机相的比例是50/50（v/v）。 反相色谱中，在已经实现分离的基础上，可以采用梯度以获得更好的峰形和合适的保留时间。 如果已有部分分离，也可以将两根相同的色谱柱进行串联；多个手性中心，不同的色谱柱表现出不同的选择性时，可以考虑进行串联。 在两个或多个手性中心的情况下经常碰到用酸用碱有不同的效果，可以将酸碱添加剂混在一起 对于Daicel涂敷型手性柱若导入错误的溶剂，柱子便会马上被破坏掉，柱压会出现明显上升，分离突然变差。一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低。 在进行正反相仪器的转换时，分别用异丙醇和流动相对仪器进行彻底的冲洗。 正相柱一般保存在100%的乙醇或异丙醇中，为保证柱压小于10MPa，冲洗速度小于0.5或0.3mL/min。因此，刚拿到一根手性柱，接到仪器上时，一定要先设定为小流速，等流动相置换过来后，柱压已降低时，才可调大流速。 进样溶液要进行过滤。 正相体系中要使用无水流动相 在使用了酸性或碱性的添加剂时，分析结束后，要用中性体系进行冲洗。 mV 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Minutes 6.71 6.87 OD-H 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 5