生防绿木霉T-DNA插入突变体库构建.pdfVIP

生防绿木霉T-DNA 插入突变体库构建 1 1* 2 1 1 1 孙虎 ，薛保国 ，施艳 ，杨丽荣 ，梁慎 ，全鑫 （1.河南省农业科学院植物保护研究所/河南省农作物病虫害防治重点实验室，河南，郑 州，450002 ；2.河南农业大学植物保护学院，河南，郑州，450002 ） 摘要：本研究运用农杆菌介导的 T-DNA 转化技术（ATMT），对生防绿木霉（Trichoderma viride ）ZBS6 进行了转化，共获得 468 个转化子，转化效率为 234 转化子/106 个分生孢子。 对随机挑选的 20 个转化子进行 PCR验证表明，含有 T-DNA的转化子比率达 90.0％。对所有 转化子进行表型分析，筛选出生长速度变异的转化子 12 个，菌落颜色变化的转化子 8 个， 产孢能力明显减弱的转化子 11 个；同时，以小麦全蚀病菌作为供试病原菌，测定了转化子 的拮抗作用，最终筛选出 2 个拮抗作用显著增强的转化子，分别为 T-79 和T-89。目前正在 分离突变体 T-79 和T-89的 T-DNA 标记基因。该研究为构建高质量木霉 T-DNA 插入突变体库 及其拮抗作用分子机理研究奠定了坚实基础。 关键字：绿木霉；T-DNA转化；农杆菌；突变 Construction of Agrobacterium -mediated T–DNA insertion library of Trichoderma viride 1 1 2 1 1 1 Sun Hu , Xue Baoguo *, Shi Yan , Yang Lirong , Liang Shen , Quan Xin （1. Institute of Plant Protection, Henan Academy of Agriculture Sciences / Key Laboratory of crop diseases and insect pests prevention in Henan, Zhengzhou 450002, China; 2. College of Plant Protection, Henan Agricultural University, Zhengzhou. 450002, China ） Abstract: Trichoderma viride ZBS6 was transformed by Agrobacterium mediated T–DNA transformation, and an ATMT library containing 4688 transformants was generated. The 6 transforming efficiency was 234 transformants per 10 conidia. We selected 20 transformants randomly and conducted DNA analysis. The results showed that transforming efficiency reached as high as 90.0%. All the transformants were analysed according to phenotype difference. Among them the number of transformants showing growth rate mutation, colony colour change and reduced conidium production ability was 12, 8, 11, respectively. Furthermore, Wheat take-all was