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蕲蛇组织提取物的分析及抗癌活性的初步研究 赵维诚 于得泉 陈立群 崔越 梁良 (辽宁省肿瘤医院沈阳110042) 摘要：目的对蕲蛇提取物成分进行分析方法。采取有机溶剂超声提取、离子交换层析及聚丙烯酰胺电 泳分析成分及体外细胞培养法检畏I生物活性。结果提纯的成分定性为蛋白质，分子量分别为1．9、2．4、 3．6kd生物活性检测有效。结论蕲蛇组织的提取，以有机溶剂提取效果最佳，生物活性检测3．6kd组 份最好。本研究的结果，有利于蕲蛇药用成分的进一步研究。 关键词：蕲蛇￡强取物；电泳；存活率 具有强烈的生物活性“’。传统医学中，一直将此品用于治疗“恶疡”。’，味甘咸、温有大毒。入肝、 脾经o’蕲蛇的蛇毒具有强烈的神经毒作用，文献报告较多。但关于蛇组织提取物的生物活性的报告并 不多见。本文将就这方面的实验进行总结、讨论。 1材料和方法 1．1 仪器与试剂BIO．PAD多功能电泳仪、上海86．3型超声提取仪、 为国营药房正品。 1．2瘤株选用H22肝癌、胃癌598为中科院药物研究所提供。 乙醇，充分浸泡16小时后．超声提取30分钟，静止后再重新提取鼹次。以4000转，分，将提取液离心 x 析柱规格为2．5cm 梯度洗脱、收集洗脱液样品、监测，波长为250rim。 1．4提取物分析采取聚丙烯凝胶电泳将提取物进行分析。电泳条件 二醇6000浓缩，加样量5ml，电泳结果与标准蛋白对照。 1．5生理活性检测体外药物敏感试验MTT法“’。四唑盐比色试验 是一种检测细胞存活和生长的方法。实验所用显色剂四唑盐是一种能接受氢原予的染料，活细胞线粒体 体中的琥箔酸脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物，并沉积在细胞中，而死细胞无此 功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其吸光度值。 MTT结晶物形成量与细胞数呈正比。 度)。另设空白对照孔，加入30u1培养液，同时4组平行样，将上述培养板置于c02孵箱中条件为39 溶解，在酶联免疫检测仪上490rim测波长，计算活细胞生存率。 2结果 2．1 蕲蛇组织提取成分多为蛋白质，与标准蛋白比较，分子量确定为1．9、2．8、3．6、4．8(kd)电泳图谱 显示较为清晰的银染色带。 2．2蕲蛇组织提取物对肝癌H22、胃癌5∞细胞均有杀伤抑制作用。肝癌抑瘤率分别为：47．6％、44．2％、 胃癌590细胞生长半数抑制浓度Ic．50为45mg／ml。两组间活细胞生长率P0．05，无显著差异。 3讨论 蕲蛇在传统医学中，一直将其做为“祛风湿、定惊搐”。用语治疗风湿瘫痪、骨节疼痛、缧疠恶庖 等，临床治疗也多与其它药物配伍使用，文献报道多以临床应用为主。基础研究也多在蛇毒的组份及其 理化性质，关于蕲蛇组织的成分研究并不多见。蕲蛇临床使用仍都是组织全部入药，它的药用价值已超 过当今药典等专著的论述。蕲蛇的广泛应用与本身的不同成分有着极为密切的关系． 蕲蛇毒中提取的酶类制剂，在l临床中用于治疗血栓，已经得到普遍的认可。关于治疗肿瘤也见报道， 《蛇志JOURNALOFSNAKE)中也报道蕲蛇酶抗小鼠实验性肿瘤转移作用”’。临床治疗中，将蕲蛇与 其它药物配伍，广泛用于治疗肿瘤，徐荷芳曾报导，蕲蛇毒治疗原发性肝癌的作用”’。但就单纯的蕲 蛇组织提取物对肿瘤细胞的抑制作用还未见报道。本文就所做的实验进行总结。并将结果进行报道，希 望为蕲蛇的深入研究提供一些科学数据。 参考文献 1．刘春安，彭明主编，抗癌中草药大词典，湖北科学技术出版社，1994，(3)1031。 2．李时珍主编。本草纲目，第一卷，人民卫生出版社1977，(1)76。 3．牛占兵、陈志强、徐树楠、曹风编著。皇帝内经灵枢卷之三经脉第十35-45。河北科学技术 出版社1994，3，(1)。 4．徒振强．吴年正主编，细胞培育，世界图书出版社，1996，4，138-139。 SNAKE，2001， 5．绳美，刘广芬，王晴川。蕲蛇酶抗小鼠实验性肿瘤转移作用研究。蛇志JOURNALOF 12，5-6。 6．荷芳，蕲蛇治疗原发性肝癌，浙江中医学院学报，1992，16，28。