应用蛋白质组学技术的研究白血病细胞耐药机制.pdfVIP

第24卷增刊 分析测试学报 Vol24 型!堑!! !竺!!!!望!!竺!!!!!竺!!篁!!塑!!!!些!型些：! !!!：!竺! 应用蛋白质组学技术研究白血病细胞耐药机制 仇晓燕1，齐静2，刘 宁1，刘淑莹“，刘志强‘，杨纯正2 (1．中国科学院长春应用化学研究所新药研究实验室，长春质谱中心，吉林长春130022； 2．中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室．天津300020) 蛋白质组学(Pmteomics)是继基因组学之后兴起的前沿学科热点，是以基因组所表达的全部蛋 白质，即蛋白质组(Proteome)为研究对象的新的研究领域，其两大支柱是双向凝胶电泳技术和生物 质谱技术。质谱技术是目前蛋白质组研究中发展最快，也最具活力和潜力的技术。诞生于八十年代 AssistedLaser 末期基质辅助激光解吸电离质谱技术(Matrix 进入了一个崭新的发展阶段，目前使用MALDI—TOFMS技术以得到酶解肽段的相对分子质量，获 据库查询采鉴定蛋白质。K562／A02细胞是应用阿霉素长期低剂量诱导建立的耐药细胞系，具有典 型多药耐药(multidrug 加入抗耐药肿瘤新药PHII一7后的差异蛋白点将有助于我们完善肿瘤细胞的耐药机制。 1 实验部分 1．1样品与试剂 K562细胞系及其耐药株K562／A02均由中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血 液学国家重点实验室常规保存，并用其实验室常规方法分别提取蛋白。IPG预制胶条(pH3—10， 17em)，载体两性电解质(Bio—Lyre3—10)，矿物油(MineralOil)购于Bio—Rad公司。Urea、 DCPro— 叉双丙烯酰胺、D1T、TPCK修饰的测序级胰酶购自Promega公司。蛋白质定量试剂盒(RC tein AssayKit)购于Bio-Rad公司。 1．2仪器与实验条件 将样品溶液0．5汕与基质溶液0．5 DESTR ttL混合，点样于样品靶上，自然干燥。在Voyager MALDI．TOF质谱仪(AppliedBiosystems)上进行检测。质谱条件：20kV，阳离子反射模式，每张谱 图累积100次，延迟时间100ns，激光频率20Hz。每个样品采集3—5个谱图。 2结果与讨论 2．1 细胞总蛋白的二维电泳分析 mr,／gel。通过 第一向等电聚焦分离采用的是宽范围线性pH梯度胶条(pH3—10)上样量为1．0 PDQUEST二维电泳图象分析软件对所得图象进行分析，包括图象加工，斑点检测，斑点匹配，在 分析后直接切取了感兴趣的蛋白点，进行胶内酶切和肽段提取。 2．2差异蛋白点的MALDI—TOFMS鉴定 原肌球蛋白3的肽质量指纹图谱见图1。 2．3结论 本研究采用蛋白质组研究技术，对多药耐药细胞系K562／A02和药物敏感细胞系K562及二者 分别加药后的总蛋白质进行双向凝胶电泳(2DE)分离分析，利用现代软电离质谱手段对差异蛋白质 进行了鉴定。所得结果有助于我们完善肿瘤耐药机制，为我们研究耐药肿瘤细胞内蛋白质的整体变 化，从中发现耐药特异性蛋白，筛选新的抗耐药肿瘤药物提供新靶点。 第24卷 分析测试学报 增刊 100 qn 80 70 60 ≮50 、41) 30 2S 10 0 906t) II94B 14636 7424 20212 2’m)0