水牛卵母细胞成熟前后差异蛋白质组的初步的研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十六届学术研讨会论文集 水牛卵母细胞成熟前后差异蛋白质组的初步研究 刘振方，付强，蒋丽，杨丽，黄愉淋，张明，卢克焕 (亚热农业生物资源保护与利用国家重点实验室，广西大学动物繁殖研究所，南宁530004) 引言 排卵后哺乳动物卵母细胞停留在MII期。该时期的卵母细胞未开启转录，而胚胎基因组 的转录直到两细胞期之后才逐渐开始【11。此外，卵母细胞的mRNA水平和蛋白质量二者之间 没有可靠地线性关系，为了筛选排卵后卵母细胞中调节卵母细胞到胚胎转化过程中更多因子， SDS．PAGE 所以通过蛋白质组学方法研究卵母细胞中蛋白质的表达水平【21。本试验利用2DE 技术结合质谱鉴定技术，分离鉴定水牛卵母细胞成熟前后蛋白质的变化，以阐明卵母细胞的 发育规律，为提高卵母细胞体外成熟的研究奠定的理论基础。 材料与方法 本实验通过应用蛋白组学最基本实验手段一双向凝胶电泳(two．dimensional protein 情况情况。 结果 建立了水牛卵母细胞双向电泳的基本条件，结果发现：7M尿素，2M硫脲比8M尿素 4～7，13cmlPG胶条能够得到清晰的水牛 更加适合对水牛卵母细胞蛋白质的提取，此外pH Master软件对比分析，检测出约300个蛋白质 卵母细胞蛋白质双向电泳图谱。经过经Image 点，并发现水牛卵母细胞成熟前后共存在27个差异蛋白，其中成功鉴定了8个蛋白质，包括 调蛋白质 讨论 本实验成功的得到了水牛卵母细胞的蛋白质全蛋白图谱，并找到了27差异蛋白质点， 成功鉴定出8个。鉴定的成功率不是很高，可能是由于这些蛋白质的量不够。由于水牛卵巢 数量的有限，这限制了卵母细胞的数量从而限制了蚩白质的量。我们功能鉴定出的HSP60蛋 分子伴侣蛋白，并认为排卵属于一种炎性事件。NMP2是一种NMP2蛋白质在GV期表达时， 分子量有所增加、等电点减低，这说明它在成熟过程中发生了磷酸化修饰。当卵细胞阻遏在 MII期时，NMP2则位于卵细胞皮质部分，这表明NMP2磷酸化酶位于纺锤体局部，或者说 NMP2磷酸化需要的一些物质的转运可能需要与位于纺锤体因子相互作用14J。2003年，有研 究人员用无NMP2的小鼠系发现母源性的NMP2在雌性生育所必须的，它对围绕在核仁和核 仁组织周围异染色质的形成有决定性的作用【5J。对于鉴定出其他的蛋白质在卵母细胞蛋白质 组的文献报道较少，对其功能仍需进一步的研究验证。 参考文献 R molecular ofthematernalto foundations transitioninthe 【l】SchulmM，The zygotic 1． preimplantationembryo[J]．HumanReproductionUpdate，2002．8(4)：323-33 J control D，Translmional 【2】Richter duringearly 179．183． L，CoenenK，Mourota1．，Maternal translated [3】Massicotte M，et housekeepingproteins during bovine maturationand 1-3820． oocyte earlyembryo A ME