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426蟋》2011年学术年会
T030067
刘振江鲁会军 刘 昊靖杰岳云强金宁一
30122)
(中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春1
引言／目的
diseasevirus，NDV)是其主要
副粘病毒是一类重要的人和动物致病病毒，新城疫病毒(Newcastle
代表种，其感染宿主主要是鸡，该病毒通过包膜与靶细胞膜发生融合进而侵入细胞使细胞发生病变。病
(fusionprotein，F)负责完成这一细胞融合过程。
T7
RNA聚合酶(T7 RNAP)是一种能特异性识别T7启动子，依赖DNA
RNApolymeraseenzyme，T7
的RNA聚合酶，在真核内具有转录活性，能够转录较大的基闪片段。
为了分析猪源新城疫病毒F和HN基因对BHK一21细胞膜融合的作用，本实验通过脂质体转染的方法
将猪源新城疫病毒F和HN基冈与T7RNAP基因共转染BHK一21细胞，产生细胞融合，为确定猪源新城疫
病毒F蛋白和FIN蛋白在病毒感染致病过程中的作用奠定基础。
材料方法
(DE3)中扩增得到T7RNA聚合酶基因，将报告基闪EGFP与T7RNA聚合酶基因一起定向克隆到痘苗
病毒转移载体pSTK
染液进行染色，显微镜下观察细胞融合情况。
结果
可见明显的细胞融合现象，证明猪源新城疫病毒JL01株的F和HN蛋白共同作用于BHK．21细胞产生
细胞膜融合。
讨论
RNAP基因
本实验中，将同源的猪源NDV病毒F蛋白和HN蛋白基因，与特异性识别T7启动子的T7
共转染BHK一21细胞，利用T7RNA聚合酶的细胞内介导基因转录的功能，使F蛋白和HN蛋白在细胞内得
到高效表达，F蛋白分子上有识别同源HN蛋白信息的特异性位点，当该位点接受到来自HN的信息后，
使F蛋白构象发生改变，暴露融合位点，导致宿主细胞膜发生明显的融合现象，而正常的BHK一21细胞和
接种痘苗病毒的细胞没有出现细胞融合现象。本研究为我们进一步研究新城疫病毒跨种感染猪等哺乳动
物的分子机制，明确猪源新城疫病毒F和HN基因相互作用的特异性位点奠定良好的基础。
参考文献
【3】李欣，杨少华，何洪彬等．稳定表达T7
【4】王志禾．副粘病毒融合蛋白分子上特异性细胞融合作用位点的初步确定【J】．中华微生物学和免疫学杂志，2000，20
(4)：289．292．
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