猪Antizyme-1基因结构分析.pdfVIP

2010，VOLUME12，NO．1ANIMALB10TECHNOLOGYBULLETrN 6l 猪Antizyme一1基因结构分析 李仕新汜，吴雪艳1，张豪1’ (1华南农业大学动物科学学院，广州510642；2．仲恺农业工程学院生命科学学院，广州 510225) 引言 抗酶蛋白是由许多序列保守的同源蛋白组成的一个大家族，目前报道的有四种(AZl、 AZ2、AZ3、AZA)。人和鼠的AZl基因都由5个外显子和4个内含子组成，其转录起始位 点都定位于第一个ATG密码子上游75和76位核苷酸处，5’侧翼区包含典型的启动子元件， 有很高的转录活性。AZl基因在原核生物、真核动物中已有很多研究报告，包括其基因组 序列、表达调控、结构域等，但在猪上相关研究报道较少；本研究对猪AZl基因结构进行 分析，为下一步研究该基凶的功能打下良好的基础。 材料方法 Premier 同源性高的保守区域。参照与猪EST同源性最高的cDNA序列，使用Primer5．0软 件在保守区域设计引物(ORF)， 基因cDNA序列为基础，设计了3对引物扩增4个内含子片断。扩增5’侧翼序列将克隆测 序得到的猪AZl基因的DNA序列与人、牛的相应序列进行比对分析，找到与猪DNA序列 同源性较高的序列，并参照其序列，在其5’端设计引物。 结果 后，对测序结果进行分析，得到内含子l、内含子2的核酸序列，长度分别为1429bp、385bp。 3、以引物IN3进行PCR扩增得到637bp的特异性条带。得到长度为391bp的内含子序列4、 以引物IN4进行PCR扩增得到长度为100bp的内含子序列。所有外显子／内含子边界处均符 PCR产物经克隆测序后，对测序结果进行分析，5’．1在原来的基础上向5’延伸了80bp，5-2 在原有的基础上向5’延伸了815bp。 讨论 随着分子生物学理论和技术的突飞猛进，通过比较基因组学克隆目的基因这一方法也趋 于成熟。本研究参照人AZl的基凶结构，对所获得猪AZlcDNA序列进行分析，将其划分 为5个外显子。通过与人、牛、鼠AZl的DNA序列比对，发现内含子1的5’端120bp左 右序列在4个物种中同源性很高，可能包含一些重要的转录调控元件。5’侧翼区的获得一直 是分子遗传学的重点和难点。本研究利用比较基因组学，在与猪同源型很高的牛基因组相应 区域设计引物，扩增得到了猪AZl基因的部分5’侧翼序列，说明此方法在获取启动子序列 方面的可行性。 基金项目：国家863计划(2008AAIOZl35) 。通讯作者：张豪，男，博士，教授，研究方向：动物遗传育种。E—mail：zhanghao@SCaU．edu．∞