牛源金黄色葡萄球菌引起小鼠乳腺炎模型建立.pdfVIP

·扬州· 第十六次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 ·93· 牛源金黄色葡萄球菌引起的小鼠乳腺炎模型建立 樊利军L2，张梦泽1，王雅春¨，俞英¨ (1．中国农业大学动物科技学院，北京100083； 2．北京维通利华实验动物技术有限公司，北京 100083) 引育 乳腺炎是奶牛常见多发病，其中金黄色葡萄球菌又是导致奶牛发生乳腺炎的主要病菌之一，由其引发的乳腺 炎潜伏期长，一般呈隐性发作，容易产生耐药性，近来受到越来越更多的关注和研究。但是以奶牛为直接实验对象， 面临操作难度大、可控性差等问题。小鼠动物模型是疾病的病因学、病理学、治疗学等研究领域的重要工具。具有样 品便于收集、操作相对简单、实验处理可控性强等优点，有利于排除动物的个体差异及其他因素的干扰。本研究通 过建立金黄色葡萄球菌小鼠乳腺炎模型，试图为以奶牛作为直接实验对象的相关问题提供有效解决途径。 材料与方法 金黄色葡萄球菌从北京某荷斯坦牛场乳房炎患病奶牛乳汁中分离培养得到。实验用小鼠选取8周龄远交系 ICK小鼠雌雄共36只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。正常给予饲料及饮水，饲养室温度控制在 d的母鼠随机分为 20-260(2。12h光照，12h黑暗．先期适应性饲养一周后，雄雌按1：1随机交配。将交配产仔后8-10 无菌生理盐水A组6只。低攻菌B组6只，高攻菌C组6只。采用电子体温计测量5个时间点的小鼠直肠温度；攻 菌24小时后。采集乳汁计数白细胞个数；采集乳腺组织做组织切片，将乳腺组织匀浆细菌培养计数，采血样测定血 常规指标。 结果 在攻菌12h后。攻菌组体温都开始有上升现象。组织切片观察可见生理盐水组乳腺组织腺泡完整，未见异常变 化，低攻毒组腺泡上皮有轻微脱落坏死现象。且有少量炎性细胞浸润，高攻毒组乳腺明显充血，间质明显增宽，高度 水肿，有大量炎性细胞浸润，渗出严重区域的腺泡上皮细胞大多坏死、脱落、崩解以致消失，许多腺泡中散在嗜中性 立细胞。乳汁中白细胞数，攻菌组都极显著高于正常组，并且，高攻菌组中乳汁中自细胞增加数比低攻菌组更加明 显；而在乳腺匀浆液的细菌培养中，低攻菌组没有培养分离出细菌，而高攻菌组则细菌感染严重。血常规指标中，低 攻菌组在淋巴细胞和中性粒细胞方面，与正常组比较没有明显变化，而高攻菌组则在各项都表现出显著差异。 讨论与结论 实验小鼠选择远交系小鼠，目的是更真实模拟奶牛群体和便于收集乳汁。攻菌方法的选取上，本文作者参考相 关研究者自制了钝头毛细玻璃管并将其连于微量进样器．在体视显微镜下将钝头毛细玻璃管插入母鼠乳头管约 1-2mm，通过乳头管将金黄色葡萄球菌注入母鼠，进而最大限度的减轻注射细菌操作中人为的对乳腺造成的物理 性损伤。本研究中，低攻菌组在组织切片观察，乳腺匀浆计数。血常规中淋巴细胞和中性粒细胞的变化上，与正常组 都没有显著差异，而高剂量攻菌组则表现出极显著的差异，说明低剂量攻菌组几乎没有或只引起很很轻微的炎症 反应，而高剂量攻菌组则引发典型的乳腺炎症反应。所以。高剂量组适合做奶牛乳腺炎模型。 关键词：奶牛乳腺炎；金黄色葡萄球菌；小鼠乳腺炎模型 (2008DFA31120)。 ·通讯作者。