复方紫锥菊体外抗肉鸡新城疫病毒的试验.pdfVIP

20 中国兽 医杂志 2008年 (第 44卷)第 11期 复方紫锥菊体外抗肉鸡新城疫病毒的试验 刘晓琳 ，仇微红 ，郭世宁 ，吴 鸿 ，李志华 (1．华南农业大学兽医学院，广东 广州 510642；2．华南农业大学生命科学院，广东 广州 510642) 中图分类号：$853．7 文献标识码 ：B 文章编号：0529—6005(2008)11-0020—02 I 材料与方法 OD值，并根据公式计算细胞存活率，找出药物对细 1．1 材料 鸡胚 ：9～11d低免疫鸡胚 ，购 自鹤山 胞 的最大无毒浓度范围 。 市墟岗黄畜牧公司；种毒：鸡新城疫病毒珠海株，由 表 1 药物 的稀释方法 华南农业大学禽病教研室保存。 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 1．2 试验药物 复方组成 ：黄芪、黄芩 、金银花、连 稀释倍数 2。 2 2 2 2 2 2 2 翘 、大青叶、桔梗 、贯众和防风；紫锥菊复方 (以下简 药物 (mL) 1 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 称紫复方)组成 ：紫锥菊、黄芪、黄芩、金银花、连翘 、 培养液 (mL) 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 0．5 大青叶、桔梗、贯众和防风 ；紫锥菊采 自华南农业大 细胞存活率 ( )=试验孔 的OD值 ／对照孔的 学生命科学院实验基地，本教研室加工；黄芪、黄芩 、 OD值 ×100 大青叶、连翘、桔梗等中药均为市售。以上中药采用 1．7 NDV对细胞半数感染量 (TCID。)的测定 传统煎煮方法制成水煎液 ，浓缩成 1g／mL。用一次 将培养成单层的细胞传至 96孔细胞培养板上 ，置于 性无菌滤器 (孔径 0．45 m)过滤 ，置无菌青霉素瓶 5 CO 孵箱中培养 18～24h。将病毒液用维持液 中4℃保存备用。 1O倍连续稀释 (10 …10 )。将培养成单层 的 1．3 试剂 DMEM(粉)，青霉素、链霉素 ，胎牛血 CEF各孔的培养液弃去 ，每孔洗涤 2次 ，各孔加入 清，胰蛋 白酶 (0．25 )，MTT，二 甲基 亚砜 (DM— 不同浓度的病毒液 100 L，37℃吸附 1．5h，各孔再 SO)，均购 自广州展晨生物技术有限公司。 补加 100 L维持液 ，每个浓度 4个重复，设正常细 1．4 主要仪器设备 倒置显微镜 ，5 C0。培养 胞对照孔 。逐 日观察各孔细胞病变 (CPE)，连续观 箱 ，96孑L细胞培养板，细胞培 养瓶 ，可调微量 移液 器，高压灭菌锅 ，酶标仪 ，超净化工作台。 察 4d，记录 CPE情况 。 1．5 鸡胚成纤维细胞 (CEF)的制备 按照常规方 1．8 药物抗 NDV药效的测定 4 法制备 ]，置于 37℃含 5 CO 培养箱中培养，待长 1．8．1 预防组 弃去 96孔细胞培养板上 已长满的 成单层后备用。