高适应性面包酵母菌株的杂交选育.pdfVIP

J 1．5．3单倍体接合能力与交配型的鉴定b 由于BY一6本身为耐高糖酵母，在高糖面团中的 与标准a型菌株形成哑铃形接合子的待测菌株 发酵力可达较高水平【3]，故只对其单倍体在无糖面 为a型，与标准a型菌株接合的待测菌株为a型，与a团中的发酵力进行了比较，筛选出在无糖面团中具有 型、a型菌株均不接合的为不育型菌株。 高发酵力的单倍体菌株。测定了28株高麦芽糖发酵 1．5．4单倍体杂交及杂交株的检出 单倍体在无糖面团中的发酵能力，结果发现：耐高糖 将a型与a型单倍体菌株混合接种于YEPD液酵母BY一6单倍体的发酵能力高低不齐(数据未列 体培养基中，28℃静置培养使之接合，24h后收集菌 出)，这暗示了面包酵母的发酵能力由多个基因控制， 其中9株单倍体菌株在无糖面团中的发酵力优于或 体，铺平板，分离单菌落，并在McClary产孢培养基上 ’鉴定其产孢能力，具有产孢能力的菌株为杂交株，编 等于亲本BY．6，即C02失量≥0．69h，4株单倍 g／2 号保存。 体为a型，5株单倍体为a型(表2)。 1．5．5面团发酵试验 2．3面包酵母单倍体的杂交及杂交株发酵力 准确称取2g鲜酵母泥加100mL水使之溶解， 通过不同配型的单倍体杂交，挑选具有产孢能力 置于三角瓶中30℃活化30min，按照表1的面团配的200株杂交株，并测定在无糖、普通、高糖面团中的 方制成无糖、普通、高糖面团，盖上发酵栓后称重，置 发酵能力，发现这些杂交株可分为3类，第1类为在 于30℃温箱静置发酵，以2h失去的C02重量来衡无糖、普通、高糖面团中的发酵力都高于亲本BY．6，4 量面包酵母的发酵力。 株杂交株属于此类，编号为杂交株ZJ一1(ZJ一4(表3)， 杂交株ZJ一1在无糖面团中的发酵力高于亲本 2 结果与讨论 30．0％，在普通面团中的发酵力高于亲本23．75％， 2．1 BY．6单倍体的制备及高麦芽糖发酵单倍体的 在高糖面团中的发酵力高于亲本9．9％；第2类为只 ‘ 筛选 在普通、高糖面团中具有高发酵力，而在无糖面团中 制备面包酵母BY一6的单倍体，经过产孢培养基 不具备高发酵力，107株杂交株属于此类；第3类为 鉴定分离到240株单倍体菌株用于此后的研究。由 在无糖、普通、高糖面团中发酵力都较差，72株属于 于无糖面团中可供面包酵母发酵的主要碳源为麦芽 此类。 糖，所以面包酵母进行的代谢途经主要为麦芽糖发 酵，而在麦芽糖发酵过程中，a．葡萄糖苷酶(a—glucosi—表3 杂交株在无糖、普通和高糖面团中的发酵力 daSe)和麦芽糖透性酶起到主要作用。根据这2种酶 分解利用麦芽糖时产酸，而溴甲酚紫遇酸变黄的原 理，设计了高麦芽糖发酵菌株筛选培养基【4J，如果菌 株Q一葡萄糖苷酶和麦芽糖透性酶分泌较多，那么在利 用麦芽糖的同时产酸会使菌落周围呈现黄色水解圈， 从而筛选出麦芽糖发酵能力高及速度快的单倍体，淘 汰了麦芽糖发酵缓慢的单倍体。通过此培养基对 一般来说，杂交育种是通过来源于不同亲本的单 240株单倍体进行筛选，发现28株单倍体菌株菌落倍体之间的杂交，以达到合并2种或多种工业菌株所 周围呈现黄色水解圈，初步认定为高麦芽糖发酵单倍 需的特性的目的∞j，但本研究对耐高糖酵母BY一6 体菌株，并对其进行配型鉴定，其中13株为a交配 单倍体进行同源杂交，来改