猪生殖与呼吸综合征病毒TaqMan荧光定量RT.pdfVIP

维普资讯 中国兽 医科学 2006，36(02)：98—102 VeterinaryScienceinChina 中图分类号 ：S852．659．6：Q503 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2006)02—0098—05 猪生殖与呼吸综合征病毒 TaqMan荧光定量 RT—PCR 检测方法的建立 宋志军 ，宋长绪 ，杨增岐 ，朱道中。，武 占银 ， 蒋智勇 ，林志雄。，刘燕玲 ，张福 良 (1．西北农林科技大学 动物科技学院，陕西 杨凌 712100；2．广东省农业科学院 兽医研究所 ，广东 广州 510640；3．广州出入境检验检疫局 ，广东 广州 510623；4．宁夏动物防疫站 ，宁夏 银川 750002) 摘要：根据 GenBank登 录的PRRSV保 守基 因序列设计合成 了引物和探针 ，并对其进行 了筛 选 ；对荧光定量 PCR的反应条件进行 了优化 ，建立了TaqMan荧光定量 RT—PCR检测方法。同时 用建立的检测方法对组织病料进行 了检测，并与常规 RT_PCR做 了对比。结果显示，所建立的 TaqMan荧光定量RT_PCR方法灵敏度可达5．0×10。拷 贝／L，比常规RT—PCR灵敏度高100倍。 用该方法对 东莞 、增城 、湛江等地的猪血清和多种组织样品进行 了检测。结果，该方法与常规 RT_ PCR检测方法的阳性符合率为 100 。用该方法对 3份不 同的组织样品进行 了重复检测 ，结果表 明，该方法具有 良好的重复性，可满足 当前 PRRS的诊断需要 。 关键词 ：猪生殖与呼吸综合征病毒 ；实时定量 RT—PCR；TaqMan荧光探针 Developmentofreal__timeTaqM an。。quantitativeRT__PCR assayfor detectionofporcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus SONGZhi—jun。一，SONGChang—XU ，YANGZeng-qi，ZHUDao—zhong。，WU Zhan—yin ， JIANG Zhi—yong ，LIN Zhi—xiong。，LIU Yan—ling ，ZHANG Fu—liang · (1．CollegeofAnimalScienceandTechnology，NorthwestSci—TechUniversityofAgricultureandForestry． Yangling712100，China；2．ResearchInstituteofVeterinaryMedicine．GuangdongAcademyofAgricultural Sciences，Guangzhou510640，China；3．GuangzhouEntry-ExitInspectionandQuarantineBureau． Guangzhou510623，China；4．NingxiaAnimalQuarantineStation， nchuan 750002，Chin) ． Abstract：Theprobesand primersweredesigned and synthesized according to the conserved gene ORF7ofPRRSV availableinGenBank，andthenreactionparameterswereoptimizedtodevelopareal—time TaqMan—quantitativeRT—PCR assay．Theserum and othertissue samplesfrom pigson farmsin Dong— guan，Zengcheng，ZhanjiangandotherareasofGuangdongProvinceweredetectedbyusingtheestablished quantitativeRT—PCR assay，andtheresultswascomp