PCR应用现状.ppt

实时荧光定量PCR仪及在国内应用现状 生物医学信息工程教育部重点实验室 彭年才 张镇西 蒋大宗 西 安 天 隆 科 技 有 限 公 司 李 明 李红东 一. 关于PCR 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction简称PCR ）自从一九九三年获得诺贝尔奖，因核酸扩增的高灵敏、高特异性，在分子检测方面的独特优势，在科研及临床的应用中至今仍越来越广。随之需求，PCR基因扩增仪也很快经历了四代产品。  1. 第一代：手动/机械手式水浴基因扩增 2. 第二代：自动控制型定性基因扩增仪 3. 第三代：终点定量/半定量（End-point quantitative PCR detection） 基因扩增仪+荧光仪+终点定量试剂 End－point quantitative PCR 4. 第四代：实时定量PCR（Real-time quantitative PCR detection system） 实时定量QPCR仪＋实时荧光定量试剂，构成QPCR-DNA/RNA实时荧光定量检测。 实时荧光定量PCR的模型优势 CT（cycler threshold）and standard curve循环阈值与标准曲线 实时荧光定量PCR特点 二. QPCR仪国内市场走向 1. 用途 该产品适用于临床及科研以核糖核酸为目的的各种PCR定量检测，可用于医学、生物、农业等诸多领域。 ? 传染病学诊断 病毒、细菌、支原体、衣原体等病原体检测，优生优育检测，各型肝炎病毒、结核杆菌、STD性传播疾病病原体、寄生虫等。 肿瘤学疾病诊断 各种肿瘤标志物、如P53、幽门螺杆菌等。 遗传基因检测 法医鉴定、亲子鉴定、遗传病鉴定等。 分析生物学、微生物学等其他应用 细胞病毒分型、序列分析、突变检测、多态分析等。 2. 用户及潜在用户 在临床应用方面，大型医院（三甲）临床分子实验室及检验科（Lab）已普及60%，即将大量购买的是二甲医院及大医院的如妇产科等其它科室。 在科研方面，几乎在生命科学的所有研究领域，都要用PCR手段。目前已购买实时QPCR的单位仍很少，这是很快要启动的大市场。 3. 国外产品占领市场 由于技术复杂，国外也只有几家有名公司产品占领目前中国80%市场，如： 美国应用生物系统公司（ABI） －Applied Biosystems 瑞士罗氏公司（Roche） －Roche Diagnostics Corporation 美国MJ －MJ Research 美国ABI ABI 7000 瑞士Roche 美国MJ Specifications Opticon_2 5. 国产仪器现状 尽管国内诸多科研及生产单位接受国家资助承担PCR仪的研制和产品化，但目前真正能称为产品获得许可进入市场的代表当今国际水平的实时荧光定量PCR 仪只有下列几家： 西安天隆科技有限公司 自主研发生产 杭州博日科技科技有限公司 日本独资 上海枫岭科技有限公司 北美进口散件组装 厦门安普利科技有限公司 自主研发生产 三. 实时荧光PCR 仪研发及产业化 TL998A型QPCR仪是在没有国家资助的情况下经校企联合经过数年努力，成功实现产业化的项目。 1. 主要技术指标 2. 产品外形图 3. 技术原理图 4. 关键技术及难点 48（96）通道、微量生物标本（2ul）、多路快速温控、微量荧光、实时连续检测 样本载台方案采用国际流行48孔、96孔，配合0.2ml标准PCR离心管，孔间距采用国际标准9mm，以便于各种标准PCR离心管如8连排管等的使用。 热盖设计，免污染、免蒸发 微量荧光检测，高灵敏度 荧光激发－高品质LED，长寿命，高均匀性。 发射荧光检测－ 高灵敏度PMT。 检测线性范围－ 101--～1010拷贝数 通道切换：光开关 首次提出并构建QPCR多路荧光光开关阵列检测方案，实现连续多路荧光检测过程的快速性。 发明专利《实时荧光定量基因扩增仪的光路检测系统》〔专利号“200410073432.1〕。 突破了实时荧光定量PCR中的关键技术，大大提高了临床医学检验领域分子核酸（DAN/mRNA）检测通量，保证了核酸检测高保真精确诊断分析的要求。 指标