北京油鸡脂肪干细胞的分离培养与生物学特性研究.pdfVIP

第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集 北京油鸡脂肪干细胞的分离培养及生物学特性研究 宫雪莲1，白春雨12，王磊1，李方华12，关伟军P，马月辉·‘ 1+中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京100193；2山西农业大学，山西太谷030801 关键词：北京油鸡；分离培养；生物学特性 引言 近年来，随着组织工程学的不断发展，将干细胞作为种子细胞进行自体移植来促使损伤组织进行更新、 修复和再生，已得到众多科研工作者的关注。2000年，Zuk等首次从人抽吸的脂肪组织中分离出了能在体外 稳定生长、增殖，并能向成骨细胞、脂肪细胞、肌细胞和软骨细胞分化的一类细胞群体，将之命名为脂肪干 stem 细胞(adipose—derived 诸多特性，这使其在组织工程领域的应用潜力越来越突显出来。目前已成功分离培养了诸多哺乳动物的 ADSCs，但对禽类ADSCs的研究尚未见报道。 材料方法 出生1日龄的北京油鸡，取其腹股沟处脂肪垫，于PBS中漂洗2～3次，剔除结缔组织膜及血管，剪碎 后用含1％BSA的I型胶原酶37C下消化1h，完全培养基终止消化，离心去上清后用接种培养基重悬沉淀 并按lxl04个，孔的密度接种于24孔板中。分别取第1，5，7代细胞计数并绘制生长曲线。对传至第3代的 骨细胞分化，茜素红染色观察结果；用IBMX、胰岛素、地塞米松共同诱导ADSCs向脂肪细胞分化，油红染 胞分化，通过检测分化后Nestin表达情况验证ADSCs向神经细胞的分化能力。 结果 显微镜下观察培养的ADSCs主要呈长梭形，原代培养5,-一6天即可传代，随传代次数增加细胞逐渐纯化， 细胞可稳定传至第11代。细胞生长曲线呈典型的“S”形。对培养的细胞进行CD29，CD44免疫组织化学检测， 结果呈阳性。向成骨细胞诱导后，细胞逐渐聚集形成结节，对诱导17天的ADSCs进行茜素红染色，结节处 呈明显的亮红色；向脂肪细胞诱导后，细胞逐渐变为扁平，胞浆中出现脂滴，用油红。鉴定ADSCs向脂肪 细胞的分化能力，脂滴为橙红色。向神经细胞诱导后，胞体拉伸，形成双极或多极形态，对神经诱导后的ADSCs 进行Nestin免疫组织化学鉴定，结果呈阳性。 讨论与结论 本研究探索了禽类脂肪干细胞的培养方法，建立了最适的培养体系。上述试验结果说明培养的禽类脂肪 干细胞具有稳定的增值能力及多向分化潜能。脂肪干细胞的多向分化潜能有望在组织工程学研究中发挥重要 作用。本研究也为应用动物细胞进行物种保存提供了一种新的细胞类型。本研究的部分结果正在用RT-PCR 及Western．blot等方法进行进一步的验证。 致谢 2007AAIOZl70)资助。 一190—