中华绒螯蟹长江、瓯江、辽河三种群+基因组DNA的RAPD的研究.pdfVIP

中华绒螯蟹长江、瓯江、辽河三种群 基因组DNA的RAPD研究。 高露姣 陈立侨 (华东师范大学生物学系．上海zo0062) 摘要用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对中华绒赘蟹长江、瓯江、辽河三个自然种群基因 组DNA进行了分子遗传标记的研究．选用的20种引物中有11种可以产生特定的扩增带型，其中 6种可以扩增出种群内个体间和不同种群十体问的多态性，占引物总数的30％．试验没有发现河 蟹种群间的特征条带，由Ne1共享度公式得到长江蟹种群内平均共享度是o．94l士o．014，瓯江蕾 种群内平均共享度是0．933士o．023，辽河蟹平均共享度是o．908士o．022．长江蟹与瓯江蟹种群问 平均共享度是o．871士o．020，遗传距离为o．129士o．020；长江叠与辽河蟹种群闻平均共享度是 o．863土o．025，遗传距离是o．137士o．025；辽河蟹与瓯扛蟹平均共享度是o．863士o．017，遗传距 离是o-137士o．017。经f值检验，种群问的差异显著大于种群内的差异．在长江置、匝江置、辽 河蟹三者中，长江蟹与瓯江蟹相似程度更大一些． 关蕾词中华绒螯蟹基因组DNA随机扩增多杰DNA 中华绒螯蟹(E一0c船fr si”￡m如)俗称河蟹，是我国名贵的淡水蟹和重要的淡水渔业资源， 在我国主要有辽河、长江、瓯江三个种群。生产实践证明．长江水系的蟹苗要优于其它水系 的蟹苗，具有生长快、个体大、产量高、效益好等优点(徐兴川，1991；杜宗汉，1996)。产 生这样的结果到底是由于环境因子的作用．还是长江蟹已积累了与其生产性能相关的基因，或 是环境一遗传互作所致，国内外尚无这方面的系统研究与报道。 近年来，因多种原因河蟹生长繁殖的生态环境遭到严重破坏，资源急剧下降；而长江中 下游河蟹养殖业的兴起，又使得市场对蟹苗需求量激增，造成天然蟹苗供不应求。为解决苗 源问题，人们一方面探索研究人工繁殖蟹苗的技术，另一方面积极开发利用其它水系的蟹苗 资源，如辽河、瓯江和闽江幼蟹等。但如前所述，其它水系的河蟹品质均不及长江水系的河 蟹，它们的蟹苗在长江流域通常生长缓慢，个体偏小、回捕率低；长江蟹引进珠江蟹后形成 了个体小、品质差的“珠江毛蟹”(彭武汉，1986)．长此以往必然会引起河蟹种群混杂和优 良品质的退化。 种质的鉴定与评价是河蟹利用的前提。但目前对不同江系河蟹的遗传学基础研究较少，为 此我们尝试运用RAPD(Random amplifiedp01ymorphicDNA，随机扩增多态DNA)这种新 颖的遗传标记，对中华缄螯蟹进行基因组DNA多态性分析，了解河蟹种群基因库．以期为河 蟹的品种鉴定、品种的遗传改良和合理开发利用河蟹资源提供科学依据。 ·上海市青年科技启明星计螂(95QMHl408)和高等学校博士点专项科研基金(9526902)资助 955 l材料和方法 1．1材料 本研究材料采集地和采集时间见表1，采集来的活体河蟹暂养在室内玻璃缸内或储放于 一70 c低温冰箱中备用。三江系的河蟹均系1997年捕捞的天然蟹苗，在专池中养成。 1．2基因组DNA提取 加sTE、sDs和蛋白酶K水浴过夜。Tris一饱和酚、氯仿异戊醇(z4：1)、异戊醇各抽提一次． 70％乙醇洗涤，o．1×TE溶解，4c保存备用。每江系各提5个体基因组DNA样品。 衰l样品采羹地夏采集时问 种群 采集地 采集时间 样品救量(只) 长江■ 上毒崇明岛 1997．9．14 45 瓯江量 浙江温州 1997．9．2 45 辽河■ 天津郊县 1997．5．15 45 1．3 RAPD反应及产物分离 用上海生物工程公司生产的zo种10bp随机引物(序列见表2)对3个种群各5个个体进 行扩增。反应总