用单抗介导的交叉ELISA对IBV毒株的分型的研究.pdfVIP

主垦童墼璺匡里盒苎宣堂盘童蔓土选堂查壁t±量堡塞塞 用单抗介导的交叉ELISA对IBV毒株的分型研究 王泽霖 金亚美 菅复春王新卫 王宪文 (河南农业大学禽病研究所，郑州，450002) 6株单抗的ELIsA反应模式比较可将来自河南、山东、江苏、广东、广西、四川等省22个地方株划分为7个不同的 2与22个地方株 抗原群，其中M4l抗原群占lo株，其仍是我国当前主要的流行型j根据两株中和单抗c2、J ELISA反应结果，可将地方株分为三大类群+即与J1反应的M{1类群，与c。反应的Y类群和与儿、c。均不反应 的第三类群，c2和J2两株中和单抗可与85％以上毒株发生反应，可为IBV制苗毒株的选择(M41和Y)提供参考 依据，此种分型方法鞍传统的分型方法简便、快速。 传染性支气管炎(m)单克隆抗体单抗介导的ELlsA f关t调传染性支气管炎病毒(IBv) j L 、 寸一 鸡传染性支气管炎(1B)是由传染性支气管炎病毒引起的鸡的一种急性高度接触性传染病。近 年来该病在我国广泛流行，在雏鸡中可造成较大的死亡，给养鸡业带来严重的经济损失。lBV血清 型众多，至少有20多种，且新的变异株不断出现，不同型毒株间缺乏交叉保护或仅有部分交叉保 护，给IB的诊断、免疫、防制带来很大困难。为控制本病的流行，生产上急需一种快速、特异的诊断 方法，对1Bv尽快作出诊断和血清定型，以便有针对性地研制疫苗，更有效地防制IB流行。 在IBv诊断和分型方法上，已经建立的方法很多，但血清中和试验费时费力，且需要一套标准 血清；琼脂扩散试验、免疫荧光试验和ELIsA试验，敏感性或特异性较低，且不能用于分型；HI试 验虽可用于血清分型，但交叉反应大，抗原制备费力，稳定性差。近年来发展起来的RT—PcR技术 和核酸探针技术，可直接检测IBv核酸，是一种特异、敏感、快速的诊断方法““，但核酸探针是群 特异的，RT—PcR和RELP结合的分型受设计引物的限制，迄今尚无一对引物能扩出所有IBV 株“：。单克隆抗体以其独特的优点，决定了它是检查表面抗原决定簇多样性的最有效手段，群特异 性的单抗可用于快速诊断．型特异性单抗可用于IBV分型或快速定型，在这方面国外已作了大量 工作=4“3取得了很大进展，展示了诱人前景。 本试验参照有关文献，选用国内广泛流行的Mass株M4l和地方肾变型分离的Y株，制备了 地众多分离株进行韧步分型，为IBV快速诊断和定型，IBV的防治和疫苗的研制提供参考依据。 l材料与方法 1．1 IBv毒株标准血清型毒株：IBV 20购自农业 院陈德威教授惠赠(来自澳大利亚禽病研究机构)；T株Massachusetts4l株、H52、H1 部兽药监察所；Afkansas株由广西农业大学兽医系李康然教授提供。IBV地方分离株：Y株、138、 E、18、云、98l7、9807、9801等株均由河南农业大学禽病所分离、鉴定并提供；广州30、广州32、广州 35由华南农大王林川副教授惠赠}90】株由江苏农大王永坤教授惠赠；肾～20#、14#、2#由四川 73— 主垦亘笪量堕芏量墨宣芏笪量至土壅生垄煎丑量丝茎萋 动植物检疫所杜元钊副研究员惠赠。 1．2 株单抗中有2株有中和活性：c2为针对Y株的s1蛋白单抗．对Y株有中和活性；J1对M41毒株 针对IBVM41的N蛋白的单抗，c2为针对Y株M蛋白单抗，均无中和活性。 1．3 ELIsA有关试剂包被液、封闭液、保温渍、洗涤液、HRP山羊抗小鼠IgG(后者由华美生物工 程公司郑州分公司提供)。 1．4病毒的繁殖取一40c保存的上述各lBv标准和地方分离株，稀释后经尿囊腔接种10日龄 非免疫鸡胚(AGP阴性)，3