中西药联合治疗结肠癌小鼠的实验性的研究.pdfVIP

． 兰幽!丝丝型型堕一 ． 一一———竺坚型旦堡竺旦 存在竞争，J{可能由j二其引物≮模板的反应性不同，使其扩增时有可能某‘个基冈‘t1 优辫扩增，而影响了另外一种基因的扩增。但是两步法的优点是能够减少加样造成的 误筹．两步法中内参基因Actin和测待基因在I司一个反应管中、I司一个RNA模板l：扩 增，电泳时加在一个孔中r4同时电泳出内参与待测基因两条条带，避免r每个样nn，i： RT—PCR第一步加RNA模扳时和最后电泳加样时由r存在加样误燕而造成的待测基 凶与内参Actin基因比值的改变，尤其是在PT．PCR过程中，许多操作是微培操作、 差少许都有可能影响到结果的情况F。我们在实验过程中发现，用阿步法扩增时， lL．1B和内参基因都能同时得到很好的扩增，且扩增出的条带比值与一步法的结果较 为致。冈此，我们采用两步法做了不尉浓度的青藤碱对基因表达的影响。另外，往 崩两步法扩增时建议第一步采用Oligo．dT引物而4i是用F游引物进行逆转录，从而避 免逆转录过程可能存在的竞争。总之，在保证内参与待基因都能够充分扩增的前提 F，采用二二步法RT．PCR方法可能更方便检测出一些小的差异，侄研究某些药效较温 和的中药及单体的时候值得考虑此方法。 中西药联合治疗结肠癌小鼠的实验性研究 陈雪华刘炳亚袁民纪玉宝李建芳朱正纲张冬青马安伦余奇文李宁丽 上海第二医科大学附属瑞金医院外科 上海消化外科研究所上海市免疫学研究所 5．FU作为消化道恶性肿瘤有效的化疗药物，早已广泛应刚丁．临床。其作JH机理L二 基本阐明。即5-FU经多种酶的催化，首先转化成5-FUMP，然后进一步转化为细胞毒 t。虽然5-FU的抗瘤疗效得到了肯定，但在临床应用同时带来严重的毒副作用。同 时，对经5-FU治疗的荷瘤动物研究证明5一Fu对治疗对象具有免疫抑制的作用而无法 持续其抗肿瘤的长期治疗。同时由于肿瘤的发生发展与机体免疫功能低下，也与失去 免疫监控能力有关。为了改善和纠正这一I临床抗瘤治疗的难题，本文试图借助中医蓟 联合治疗以探索一新的辅助5-FU的if}疗途径。近年来许多文献报道黄芪是一种常刚 扶止中药，能增强机体细胞免疫及体液免疫功能。男者根据中医经络理论，针刺穴位 Ⅳ以凋汀机体免疫功能。穴位注射药物不仅』{有药物作用，而且能够发挥穴位的相时 特异性作Hj以及针刺的刺激作用，起到调*精气和抗癌的般重作朋。本文没计通过中 —一 型型!丝生塑鲨!翌丝 一 型￡圭!!生堡!生曼 曲黄蚝年¨药饼灸的辅助性应剧，达剑增强机体的免疫功能，借以d：向调1y嗣|于^抗受5- FU治疗而引起荷瘤小鼠免疫功能低p或抑制所引起的剐作用。 材料和方法 实验动物：雄性BALB／c小鼠，5-6周龄，体重209左矗(巾囤科学院上海实验动 物中，0提供)。 肿瘤细胞株：小鼠C26结肠癌细胞株(中国医学科学院北京药物研究所提供，本 窀常规传代培养)，小鼠自血病细胞株YAC．1(由上海第：医科人学免疫研究所提 供，本室常规传代培养)。均培养t-10％FCS—RPMll640完全培养液中。 以法 小鼠结肠癌模型的建立：Hj无菌生理盐水调整C26鼠源性结肠癌细胞浓度卒5× 106／ml，每只小鼠血腋皮F接种O．1ml。共35只小鼠。 实验分组：实验分5组，每纽7只。 乍理熊水治疗细(A组)；从接种肿瘤细胞24小时后开始治疗试验，每只小鼠 隔犬穴化(足■里)注射乍理盐水0．1m1连续．周。 5．Fu治疗组(B组)：每只小鼠每隔一大腹腔注射5-FI J0．25mg／0．1ml(12．5mg／kg， lj海旭东海普约业有限公|了)，连续-二周。 黄比联合5．FU治疗组(C组)：每烈小鼠隔火穴佗(足i里)汁射黄芪注射液 0．1ml， (29l／m1)(上海未丰制药有限公司生产)，砌时每隔一人腹腔注射s— FUO．25rag／0．1mI，连续二周。 约饼灸联合5，Fu治疗组(D纽)，每只小鼠隔灭在中腕、神阙、芙云穴位片j曲并