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嗜水气单胞菌在不同pH值和温度条件下生长研究 杨广余文斌刘全兰张定国郭增兵 (湖北农学院动物科学系，荆州434103) 提要对嗜水气单胞菌在不同pH值和温度条件下生长情况进行研究，结果表明：嗜水气 单胞菌生长的pH值范围是6．0--10．0、最适范围为6．5～7．5：而温度则为3012左右时生长 最好。 关麓词嗜水气单胞菌，pH值，温度 thereseachofAeromonas7S underdifferentand things ph Abst叫through hydrophilagrowing ideal isabout resultshows is the tempreture．the optimunspH 6．5～7．5；and temperature 30℃． Aeromonas Keywords hydrophila，pH，Temperature 嗜水气单胞菌的分布极广，在水、土以及各种食物中均能够分离到，在家鱼肠道及中华 鳖的消化道中也曾分离到该菌，1970年已经被确认为人的肠道病原菌。因此，自70年代开 始，对该致病细菌的致病机理郎已进行了大量研究。在我国，随着淡水特种养殖规模的不断 扩大，高密度、集约化养殖方式的大量推广，水产养殖对象的发病率也日益增多。在众多侵 袭性疾病的病原体中，细菌是危害较为严重，其中又以嗜水气单胞菌对中华鳖养殖所造成的 经济损失最为惨重，近年来，国内学者对该菌的致病性也极为关注。但是，已有的研究多集 中在病原菌的分离、敏感药物的筛选、致病力的研究和对其防治方法的探索等方面。而对该 茵的生长条件、培养条件等的研究较少。作者通过对嗜水气单胞菌在不同pH值和温度条件 下生长情况进行了研究，现报道如下。 1材料与方法 1．1 菌种来源试验使用的菌种是作者从患红底板病的中华鳖血液中分离所得，并经生理 生化柱验为气单胞菌属嗜水气单胞菌种(AeromonashydrophiN)。实验前将所用的菌株进行 24h复壮培养。 1．2细苗培养细菌培养采用营养肉汤培养基(配方：蛋白胨lOg、NaCkSg、牛肉膏39、 蒸馏水1000mL)，pH值及培养温度依据实验要求设定。每支试管中加入5mL培养基，置高 温高压灭菌锅中，1．5个大气压灭菌30min，然后，在超净工作台上，向每支试管中加入经 过复壮培养并混匀的菌悬液100止，将试管放人恒温培养箱中培养24h。 1．3细菌悬液吸光值的测定对细菌悬液吸光值的测定采取以下方法：将恒温培养后的细 菌悬液离心，离心沉淀加入等量的无菌生理盐水，经混匀器混匀后，用721分光光度计在 560nm处测定其吸光值。 1．4细菌浓度与吸光值关系的确定细菌浓度与吸光值关系的测定采取如下操作程序进行： ·62· (依次编号为1～9)，测定前9只试管中细菌悬液的吸光度：将最后一支试管作1／10稀释， 并依次作1／10稀释。根据实验设计，将试管号与稀释度列表l。将作1／10稀释的试管，依 此每管取O．2mL进行平板培养计数，至培养皿中的菌落数在30-300个范围内时为止。根 据倒推法计算细菌浓度与吸光度的关系，并参照Lambert．B∞r定律：kgJo／I=k·C求出常 数k。 表1试管号与稀释度 注：表中N、M丹剐代表试管l、10的细菌浓度，第10昔中的细菌浓度是第9管中的1／10。 I．5细菌培养时pH值和温度的设置本实验中pH值设定为14个梯度：4．5、5．0、5．5、 支；温度梯度设置为：15℃、27℃、30℃、37℃、50℃，每个温度梯度用试管4支。 2结 果 2．1细菌浓度与吸光度的关系使用分光光度计测定前8支试管的吸光度见表2，将稀释 的第23支试管采用平板计数法计数，结果表明：在O．2mL稀释液中舍活细苗数为103个。 因此，可以推知第2～6支试管的细菌浓度见表2，其中第4支试管中所含的细菌浓度为 logIo／I为吸光度、C为细菌浓度。 表2纲蕾浓度与暇光度的关系 +拄：在8直试臂中以