应用SMART+cDNA合成技术富集鸡脾脏微量RNA.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会第十六次学术研讨会论文集 4．4使用哈兽研究生产试剂盒做PCR实验结误食而致死亡。 果为阴性。 5．2近些年，国家对禽流感防范意识增强，宣传 4．5组织涂片镜检未见致病菌。 力度加大养殖场户的防范意识不断提高，每遇禽群 5、结果分析 快速大批死亡的现象出现，均立即上报疫病防控中 5．1通过血清学和细胞培养实验室对病原检查 心，疫病预防控制中心重大疫病处置室派专家出现 未检查到致病菌，禽流感病毒和新城疫病毒均未检 场，经调查取样定论，按照重大疫病处置方案和国家 出，这就说明，喜鹊死亡原因既非细菌性也非新城 的相关防范措施政策法规法律指导养殖场户，养禽 疫，禽流感病毒感染所致，而是由其他因素所致，进 在各级政府业务主管部门和养殖场户配合下，禽流 一步讨论，这些喜鹊暴死，均集中在半山坡麦田地头 感疫病防控目前得到了良好发展，趋于稳定。 而且嗉囊及胃内容物均发现有未消化的大粒玉米， 5．3在全国和谐盛世的今天，更应注意生态资 此时节也不是玉米成熟的季节，玉米从何而来，分析 源的保护，鸟类是人类的好朋友，保护鸟类是人类义 认为是此时是村玉米播种季节，询问农户人家说是 不容辞的责任。 毒物侵种玉米点播洒落在地头，被急于觅食的喜鹊 参考文献略： 应用SMARTcDNA合成技术富集鸡脾脏微量RNA 兰道亮+，岳华，汤承 (西南民族大学生命科学与技术学院，成都610041 E—mail：yhua900@yahoo，corn．on) 近年来，随着鸡全基因组的测序完成，人们越来 会自动转换模板，以SMART引物作为延伸模板继 越关注鸡相关基因的表达及其功能的研究…，这也 续延伸cDNA单链直到引物的末端，这样得到的所 是近年来的研究热点之一。要对基因表达及其功能 进行研究的首要前提之一便是获得高质量的RNA 列，另一端有已知的SMART引物序列，合成第二链 后便可以利用通用引物进行扩增¨1。本研究即在原 (mRNA)及cDNA。但是有时由于研究样本的起始 量十分有限(如通过激光俘获的样品，流式细胞仪获 有SMARTeDNA合成技术上，做了必要的优化改 得的样品等)，或样本自身的特殊性(如脾脏、胰腺等 进，同时与传统方法进行了比较，可成功地从鸡脾脏 微量RNA中扩增出大量且全长的cDNA，使微量 组织富含RNA酶拉1)，亦或研究目的的特殊性(如 通过共聚焦显微镜，只选取一至两个细胞进行研 RNA得到指数级的富集，为下一步进行基因的相关 究)，此时采用传统的方法从这些研究样本中获得 研究提供有力的保证。 RNA及高质量的cDNA就非常困难，效率也很低 材料与方法 下，这无形中就限制了对其相关基因的研究。然而 RNA，先利用SMART引物 通过SMARTcDNA合成技术可以很好地解决这类提取总RNA，取20ng MechanismAt (引物序列参照SMART试剂盒，由大连宝生物公司 问题。SMART技术全称Switching 5’endoftheRNA 合成)合成带有特异引物序列的双链cDNA，随后利 Transcript，其原理是在合成cD— 用与引物序列互补的通用引物进行PCR的扩增和 NA的反应中事先加入3’末端带Oligo(dG)的 富集。整个合成过程在原