色谱法分离卵磷脂地研究.pdfVIP

李 卫，邵友元，黄光斗 (湖北工学院化工系，湖北武汉4粼) cIIl×40 摘要：对以硅胶为吸附剂的1．5 cm色谱柱分离卵磷脂的操作条件进行了系统研究。利 用薄层层析法确定了洗脱剂的组成为：甲醇，氯仿混合液(pH=3—4)。通过洗脱方式及梯度差 实验，得出梯度差为y(cH30H)：y(cH娼)=(1：2)一(1：2)的凹形梯度洗脱为最佳洗脱方式的 结论，其洗脱剂用量仅为柱体积的5～6倍，洗脱时间为6b左右。 关键词：色谱法；卵磷脂 中图分类号：删．96；蚴．3 文献标识码：A 有关卵磷脂色谱分离方面的研究，国外有报 一支注射器沿柱壁将样品溶液慢慢加入色谱柱，打 道【lJ，但其洗脱方式局限于恒定组分洗脱和阶段洗 开旋塞，排出下部流出液。然后连接柱的进口，用甲 脱，洗脱时间长(需十几个小时)，洗脱剂用量大(是柱 醇，氯仿混合液开始进行梯度洗脱。用自动部分收 体积的几十倍)。在洗脱剂的选择方面，采用的是正 集器收集流出液，用紫外检测仪监测。最后，合并含 己烷，甲醇混合液。由于正己烷与甲醇不互溶，造成 卵磷脂的洗脱液进行浓缩、干燥。 了洗脱过程中洗脱剂组成变化波动大，洗脱效果不理 2结果与讨论 想。针对这些情况，作者主要从洗脱剂组成和洗脱方 式上对卵磷脂的色谱分离进行探索，希望以尽量少的 2．1紫外检测仪波长的确定 洗脱时间和洗脱剂用量达到满意的分离效果。 实验所用的紫外检测仪有4个波长：Al=220 I】IIl，A2=254 1实验 脱液中含有氯仿和甲醇，所以选择的波长应首先保 1．1原料 证这两种溶剂在此波长处无吸收。根据资料报 卵磷脂粗品(市售) 1．2主要试剂及材料 m，所以选择的检测波长应大于245啪。 氯仿(AR)、甲醇(AR)、硅胶(200目)。 为了找到卵磷脂的最大吸收波长范围，此处采 1．3仪器及设备 用日本～岛滓紫外扫描仪对卵磷脂样品进行扫描， 结果如图1。 色谱柱(1．5×40cm)、恒流泵(HL一2，上海青浦 仪器厂)、紫外检测仪(zT—P，通力实验检测仪器 厂)、记录仪(Ⅻ∞l一100，上海自动化仪表三厂)、自 动部分收集器(BsZ一160，上海青浦仪器厂)。 1．4实验方法 1．4．1 卵磷脂粗品的初步处理 将卵磷脂粗品溶于3份乙醇中，过滤，滤渣再用3 份乙醇溶解。如此反复操作3次，合并滤液，将滤液浓 缩到原体积的1／lo。用丙酮研洗2．3次，真空干燥。 图1卵磷脂紫外光谱图 1．4．2色谱法分离卵磷脂 将经过初步处理的卵磷脂样品溶于氯仿中。用 从图l中可以看到，当A=240～260砌，有最大 收稿日期：2001—01—03 基金项目：湖北省教委资助项目(988006) ·232· 全国第十次工业表面活性剂技术经济与应用开发会议论文集 2001年 吸收峰，所以选择A=254啪作为对洗脱液进行监 测时的波长。 层层析实验，结果如图2(操作条件：10锄×20cIll硅 2．2’Ⅱ￡法(薄层层析)选择洗脱剂 胶60薄板；上行法展开；室温下操作；碘蒸气显色)。 分别用甲醇、氯仿以及中性、碱性、酸性的甲醇， 甲醇展开剂 氯仿展开剂 弄霈簿豁 翥麓莩譬 甲醇／氯仿展