增骨Ⅲ号促进骨形成机理地研究.pdfVIP

增骨Ⅲ号促进骨形成机理的研究 湖北中医学院附属医院骨科(430061)魏玉玲 I临床及前期实验(待发表)已证实增骨IⅡⅢ号序贯疗法有明显的防治骨质疏松证作用， 增骨m号主要作用于骨形成。为了进一步探讨其作用机理，本实验从超微结构进行观察，报 道如下。 I．材料与方法 · 片机，小鼠灌骨器(用ZML注射器接4—5cm长充的玻璃管或将长针头尖磨平制成了)，增骨 Ⅲ号浓煎剂(处方主要药物见I临床报道，由本院药剂科煎药逍缩，灭菌后分瓶封装，每毫升含 生药29，其它常规电镜制片试剂均由湖北医科大学电镜室提供。 1．2动物及饲料采用伊朗雄性昆明种小鼠20只，体重25．0±1．99，鼠龄12周，饲料 为精制小鼠饲料。均由湖北省医学科学院动物实验中心提供。 1．3动物造模分组及给药。取上述小鼠，用乙醚吸入麻醉，在前肢剪毛、消毒，切开皮 肤约0．5cm，从肌间隙钝性分离直达桡骨中段，用小钢锯条锯断桡骨，造成1．5mm缺损骨 折，缝合皮肤。造模后动物随机分为2组，分笼喂养。一组为实验组，灌胃服增骨m号浓煎剂 2．5ml／日(含生药5E)。另一组为对照组，灌胃给予等体积的生理盐水。两组动物均在同一实 验室内饲养，饮用自来水及食用精制饲料均相同。 1．4标本及切片制备。动物术后2w和4w，分两批采用颈椎脱位法处死，在无菌操作下 取骨折处贩痂，置人4℃冰箱内贮存过夜，取出用刀片修成1．5mm3大小骨痂组织块，以 2．5％戊二醛前固定(4℃)，0．1M，PH7．4的磷酸缓冲液冲洗，然后用1％饿酸后固定，再依次 放人50％、70％、80％、95％及100％酒精的脱水，每次lo分钟，然后用丙酮脱水二次，丙酮 和包埋剂浸透4小时，环氧树脂F脂2包埋。制成的标本块用瑞典LKB一Ⅱ型超薄切片机{刃 片。最后用醋酸铀及橼酸铅双重电子染色，在透谢电镜下观察。 2，实验结果 2．1对照组术后2w，可见：(1)毛细血管数量少。管腔不大．大多由单个内皮细胞构成整 个管腔。血管内皮细胞似椭圆形，胞膜不光滑，可见少许凹陷，脆核不光滑，有许多小切迹，核 仁也不明显，染色质细密，主要为常染色质，细胞核与细胞质之比大，胞将不丰富，细胞器不 多。(2)前成骨细胞呈不规则卵圆形或梭形，以常染色质占优势，胞质内粗面人质网及线体极 少，高尔基体亦少见，但可见一定量的糖原，细胞周围很少有胶原纤丝。{3)有大量的成软骨 细胞及细胞周围原纤丝。成软内细胞具有典型的扇晗样胞膜，核仁明显，常染色质多，胞质内 细胞器丰富，胞外基质内有较多短的胶原纤丝．不规则排列，无周期性模纹。 术后4W，可见：(1)毛细血管增多，增粗，胞质内细胞器仍少，且有较多空泡。(2)有较多 ·69· 的成骨自lJ胞，核与胞之比大，核内为常染色质占优势，细胞器丰富，胞外基质内有较多的具有 周期性横纹的胶原纤丝。 2．2实验组术后2W，可见：(1)有大量的毛细血管，管腔大，并见细纲胞通过。内皮细胞 核呈扁平形，胞质内富含吞饮小泡，线粒体及粗面内质网。(2)有大量的层状排列的成骨细 胞。胞核呈卵圆形，核内为常染色质占优势，胞质内有丰富的细胞器，胞外基质内有较多的成 熟的具有周期性横纹的胶原纤丝。 术后4W，可见：(J)大量的骨细胞，位于骨陷窝内。成熟的骨细胞体积不大，胞外约l一 2urn的区域内有胶原微纤维分布，但元磷灰百结晶沉着，细胞器不丰富，有细胞突起较长并 穿过骨小管。较幼稚的骨细胞，体积较大，细胞器丰富。(2)有破骨细胞出现在骨小梁周围，体 积巨大，形态不规则，核多，核内异染色质我，细胞器丰富，并有大量的大、小空泡，在空泡内 含有针形骨盐结晶，在接触骨组织的部位有许多指状突起构成皱褶缘。 3．讨论 3 1动物模型的评价。实验研究骨修复超微结构的模型很多，常用的有家兔及大鼠，小 鼠的研究，为了研究的连贯性，故本实验亦采用小鼠桡骨骨折模型。按照小鼠骨折愈合规 律，术后2W是软骨修复高峰，之后进入骨基质骨化及塑形期，术后4W达骨化及塑形高 峰。故本实验取术后2W及4W两个时间点进行有重点的超微结构观察，以冀更能客观地反 映骨形成的状况。 3．2增骨Ⅲ号在细胞水平方面的作用。实验发现术后2W，对照组动物骨痂内毛细血管 数目较少，内皮细胞中细胞器较少，提示内皮细胞功能不活跃，骨痂内