新型pH敏感相分离高分子的制备与其在免疫分析中应用的研究.pdfVIP

～ 坌堑些兰塑些堕童垫些 新型pH敏感相分离高分子的制备及其 在免疫分析中应用的研究‘ 朱庆枝杨黄浩陈石挛东辉陈小兰许金钩 (厦门大学化学化工学院现代分析教育部重点实验室厦门361005) 关键词pH敏感高分子相分离荧光免疫分析 聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIP)温度敏感高分子以其独特的温度敏感性质已成功地应用于免疫分 柿”】。但是这类温度敏感相分离免疫分析的免疫反应温度必须控制在PNIP的相转变温度(31℃) 以下，这不可避免地会影响免疫反应速度。pH敏感高分子是另一类对环境敏感的智能型高分子， 在其相转变pH值附近发生沉淀与溶解的可逆性变化。目前，pH敏感高分子在免疫分析中的应 用并没有受到重视，到目前为止只有一篇报道心这主要是由于现有的pH敏感高分子的相转变 nH大都在oH=3左右，在该口H值下，免疫反应生成的抗原．抗体免疫复合物会受到不同程度的 破坏，从而限制了这类高分子在免疫分析中的应用。本文将N．异丙基丙烯酰胺与甲基丙烯酸 MAA)，以其作为免疫反应载体，建立了乙肝表面抗原的pH敏感相分离荧光免疫分析系统。其 测定灵敏度基本和固相法相当，而免疫反应平衡时间只需4rain。 1 A．多抗偶联物的制各 pFl敏感高分子研f口_co．MA pH敏感高分子的临界相转变pH对高分子是否能用于免疫分析非常重要。适台作为免疫分析 载体的pH敏感高分子的临界相转变pH应该尽可能接近中性且相变pH范围要尽可能小。在本 验结果表明，当初始反应NIP与MAA的摩尔比为35：1时，得到的pH敏感高分子的临界pH为 5．6，在该pH附近可咀发生沉淀与溶解的快速可逆性变化。当溶液pH低于5．6时(37℃)，高 分子很快从溶液中沉淀出来，而当溶液pH大于6．1时．高分子则又很好地溶于水。以其作为免疫 3将免疫复合物分离，实现 分析载体，在口H=7．0时使免疫体系发生均相免疫反应，然后在pH=5 均相免疫反应和异相分离。从而建立既具有均相反应快速性、又有异相免疫分析高灵敏度的pH 敏感相分离免疫分析方法。 本实验利用N．羟基琥珀酰亚胺丙烯酸酯作为抗体与高分子的偶联试剂，根据共聚原理，将 抗体与pH敏感高分子共价偶联。实验结果表明。抗体与高分子偶联后并不会影响高分子的pH敏 感性质。抗体在高分子上的固定效率为60．5％。进一步研究了免疫球蛋白在pH敏感商分子上的非 特异性吸附情况。结果表明，抗体在水溶性pH敏感高分子上存在着一定的非特异性吸附．但这 种非特异性吸附作用很弱．远小于抗体对疏水性材料(如96．孔板)以及热敏高分子的非特异性 吸附。对于50 uL时，即可很好地消除抗体对高 ug／mL的抗体，当0．3％的BSA溶液的用量为30 分子的非特异性吸附。本文选用50 0．3％BSA溶液来消除抗体蛋白对pH敏高分子的非特异性 pL 吸附。 ·教育部博士点基金和福建省自然科学基金资助项目。 分析化学的成就与挑战 2免疫反应动力学 在一定温度范围内，温度升高可有效地加快抗原与抗体的免疫反应速率，通常所采_L}j的免 疫反应温度为37℃。本实验的均相免疫反应可以在37℃进行，其平衡时间为4rain，远少于热 min。 敏相分离免疫方法所需的反应时间刚。本文选用37℃免疫反应5 3工作曲线及样品测定 以HBsAg作为分析模型，考察了该法用于免疫分析的可行性。在最佳免疫反应条件下，HBsAg 在0 000 ng／mL～lnedmL范围内与体系相对荧光强度呈良好的线性关系。利用上述方法对正常人 和乙肝病人血清中的FIBsAg进行了测定，并和酶联吸附免疫分析法进行了比较(表1)，结果令 人满意。 表1人叫青中乙肝表面抗原含量的测定 ELISA…