实时定量PCR对猪细小病毒自然感染猪体内病毒分布情况的探讨.pdfVIP

第四次猪病学术研讨会会议论文集 实时定量PCR对猪细小病毒自然感染猪体内病毒 分布情况的探讨 李金磊‘魏战勇1韩志涛1耿静微1陈红荚2崔保安1‘ (1．河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002；2．河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002) 摘要 【目的l探讨猪自然感染猪细小病毒(PorcinePan，0vims，PPv)后病毒在体内的分布情况，分析病毒对猪器 Green 官组织的嗜性，揭示猪细小病毒致病机制。【方法】利用已建立的猪细小病毒sYBR I实时定量PcR检测方 法，定量检测自然感染仔猪、母猪和同时混合感染有猪圆环病毒的仔猪器官组织中PPVDNA的相对含量。分析猪细 小病毒的组织嗜性及其与圆环病毒混合感染时的相互作用机制。【结果】在多种器官组织中均可检测到PPv，在感 染仔猪的肾脏、脾脏、髂下淋巴结中病毒含量较高(为1．39×105一1．8l×106此一1)，在感染母猪的肾脏，脾脏，肺 妊娠母猪子宫的嗜性最强，对肝脏的嗜性较弱。PCv2的混合感染可促进PPV在肺脏的复制增殖，增强了PPV对 感染器官组织的亲嗜能力。 关键词 猪细小病毒；猪圆环病毒2型；实时定量PcR；体内分布规律 猪细小病毒(PorcinePaⅣovns，PPV)足引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原体之一，初产妊 娠母猪感染后，经胎盘侵袭胚胎或胎儿，引起母猪流产、胚胎夕E亡、胎儿畸形及木乃伊化，致使母 猪不孕或反复发情，同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻¨J。猪细小病毒在猪群中检出率甚高，在猪群 中的血清抗体阳性率达50％～80％，给养猪业带来巨大的经济损失【2J。猪圆环病毒2型(Po∞ille circovims type wasting 响和制约着养猪业的发展pJ。冈此，PPV的发病机理和致病机制以及PPV与PCV2混合感染后的相 互作用机制成为当前研究的热点之～。2005年，Wilhelm等14’建立了针对PPVVP2基因的实时定量 PPV在肺脏、肾脏、脾脏、淋巴结、子宫中的含量较高。目前，对猪细小病毒致病机制的研究多集 中在人上感染 妊娠母猪后病毒在体内的分布规律上，而对自然感染猪细小病毒后猪体内各器官组织中DNA 相对含量分布的研究尚未见报道。同时，PPV和PCV2混合感染对PPV在不同组织分布的影响也尚未 Green 见报道。本试验利用李明风已成功建立的sYBR I实时定量PCR检测方法l6|，定量榆测自然感 染猪的器官组织中PPVDNA的相对含量。为研究PPV分子发病机理及致病机制提供理论参考和试验 依据，以期为预防控制PPV、PPV与PCV2混合感染提供理论支持。 l材料与方法 I．I病料的采集 河南省焦作某猪场20日龄7头发病仔猪及3头疑似PPV感染妊娠母猪，其中发病仔猪在临床症状 上表现为精神萎靡、消瘦、皮肤苍白、腹股沟淋巴结肿大、皮肤出血点较多，剖检可见肺脏有散在 出血斑点，肺尖叶、心叶发生肉变，肾脏乳头出血，腹股沟淋巴结、髂下淋巴结出血、水肿，脾脏 边缘呈锯齿状，稍肿；妊娠母猪多次发生流产，屡配不孕并反复发情，剖杀前尤明显症状，解剖发 现母猪子宫内膜有轻度炎症，出血，胎盘有部分钙化。无菌采集病猪心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾 脏、髂下淋巴结、予宫内膜等器官组织作为检测对象，并经病毒分离、中和试验、PCR、ELISA检 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、副猪嗜血杆菌(HPS)、刚地fj形虫(Toxoplasmagondii)等发 [基金项目】河南省杰出人才创新基金项目(0621002loo) [通信作者】崔保安(1948一)，男，河南荥阳人，教授，博士生导师，主要从事分子病原学及分子免疫学研究． E—mail：b跏clli遥油嘲u．耐u．∞ 其他论文 用经实验室诊断为无病原感染的l头『一H龄健康仔猪及1头妊娠母猪作为对照组，与自然感染猪同步 剖杀，采取同样脏器作为阴性对照。 1．2主要试剂和仪器 GreenpreMix聚合酶、DNAMad(er 死印IM酶、SYBR