光散射法快速灵敏测定和表征啤酒酵母.pdfVIP

Vol. 27 高 等 学 校 化 学 学报 No. 6 2 0 0 6 年6 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 1023 ~ 1027 光散射法快速灵敏测定和表征啤酒酵母 陈绍芬，黄承志，谭克俊 （西南大学化学化工学院，重庆4007 15 ） 摘要 研究了啤酒酵母的光散射光谱. 结果表明，在波长308. 0 nm 处，光散射强度与啤酒酵母浓度在2. 0 X 104 ~ 2. 0 X 106 Cell/ mL 范围内呈线性关系，检出限（3! ）为4. 94 X 102 Cell/ mL. 将此方法成功地应用于培养 液中啤酒酵母含量的快速、灵敏的测定，并对其散射光谱进行了表征. 关键词 光散射分析法；散射截面；吸收截面；啤酒酵母；生物量 中图分类号 O657 文献标识码 A 文章编号 0251-0790 （2006 ）06-1023-05 光散射技术已在超分子化学、物理化学、胶体化学和分析化学等领域中得到了广泛应用，成为测 定分子量、表征微粒大小和粒度分布的一种技术. 特别是利用荧光分光光度计保持激发和发射波长相 同时测定散射信号建立起来的一种新的光散射（Light scattering ，LS ）分析法因其实验仪器简单、方法灵 ［1 ~ 4 ］ ［5 ，6 ］ 敏度高而备受关注，已成功地用于生物大分子组装体的表征 、蛋白质和核酸分子的构象分析 、 ［7 ］ ［8 ，9 ］ ［10 ~ 12 ］ ［13 ，14 ］ ［15 ］ ［16 ］ DNA 杂交 和生物大分子（如核酸 和蛋白质 ）、药物 、痕量金属离子 及表面活性剂 等的定量分析. 由于散射光谱与纳米粒子和超分子组装体的粒径、吸光特性、形貌、刚性、折光指数以 及光源辐射强度分布等因素有关，因此散射光谱将在大粒径的生物微粒如细胞、细菌等分析研究方面 具有独特的应用，是研究血细胞、兔红细胞、溃疡病菌和大肠杆菌等的灵敏分析技术［17 ~ 20 ］ . 在细胞培 养实验中，测定生物量（或细胞浓度）是确定细胞培养过程中细胞生长动力学和深入研究细胞代谢调控 ［21］ ［21，22 ］ ［23 ］ ［24 ］ 的基础. 测定方法有平板记数法、过滤称重法 、血球记数法 、电导率法 、浊度法 、荧光染 色法［25 ］ ［26 ］ 以及流式细胞术 等，但其中有些方法由于人为因素多、误差大、时间长，易使操作者疲劳而 影响准确性；有些方法则缺乏较高的灵敏度. 流式细胞术虽然能够快速灵敏地定量细胞，但由于仪器 价格昂贵且操作较复杂，未能得到广泛的应用. 酵母菌（S. cereuisiae ）是人类实践中应用比较早的一类单细胞真核微生物，测定发酵过程中微生物 菌体的数量及菌体的生长情况，对发酵过程和发酵产品品质的控制具有重要意义. 并且S. cereuisiae 是 一种可用来进行药物筛选的理想模式生物，与哺乳动物细胞有许多共同的生化机制，存在许多与人类 疾病相关的基因. 本文用荧光分光光度计保持激发和发射波长相同测定的光散射信号对S. cereuisiae 进 行了表征和测定. 实验结果表明，酵母菌浓度与