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一株Clostridium属厌氧菌的分子鉴定与产氢特性.pdf
第27卷第2期 v01.27.N02
20嘶年2月 陆.2006
李永峰1,任南琪1,杨传平2,李建政1,王兴祖1,李鹏1
(1.哈尔滨工业大学市政环境学院,喑尔滨150090;2.东北林业大学林业资源与环境学院.哈尔滨150024)
测定其产氢昔和细菌牛长的结果表明,菌株№衄anqil邶3在葡萄糖浓度为12.59,L时具有最大的细胞生长量和比产
气率,分别为o
产氢率分别为00710D600肿和o.10nd评,mol—ucose。
关键词:生物制氢;产氢细菌;分离纯化;16剐)NA测序;产氢特性
中图分类号:1x6.田819文献标识码:A
o 前‘言 L2囊嚣te滚管法、厌氧管斜面法、平皿
生物制氢技术利用高浓度有机废水或其它生物 夹层厌氧法和平板培养瓶厌氧法”1。
质制取氢气,反应条件温和,具有开发新能源、节省 1.3 16srDNA扩增与测序
能量消耗及净化环境的多重意义。利用高浓度有机 正向引物BsF8/加:5’.AG
废水进行生物制氢,实质是产氢产酸发酵细菌降解
有机物质释放出H:。因此分离鉴定高效产氢细菌 G耵1℃A
c1TIC.3’。测序由上海博亚生物技术有限公
是解决发酵法生物制氢产业化工程菌的重要课题。
‰ish0,Y等“。首先进行产氢发酵细菌的研究,国内
外学者为此付出了艰苦的努力n一。但是仅仅局限
于一些菌种上,遗传基础狭窄,还不能进行生产的实
际利用…。为分离鉴定高效产氢细菌的新种质和新
物种,我们开展了分离鉴定产氢细菌及其产氢性能
的研究,以期获得在生产上的应用。
l材料与方法 糖电泳回收检测。
1.1菌株分离与培养 1.4国际数据库注册
从生物制氢反应器中取lOrnL产氢发酵活性污
泥,放人无氧灭菌的装有多粒玻璃珠的培养瓶中,在 Bmk进行序列比较分析,并注册国际生物信息学数
振荡器中振荡1h或手工摇瓶30min将菌胶团打碎。
据库GenBank。
用脱氧无菌水或脱氧无菌生理盐水10倍梯度稀释, 1.5理化指标分析
接种于固体培养基中或平板培养或制成滚管培养。 试验体系中氢气产量、葡萄糖含量、菌浊0D值
培养时间为20d。采用LM.1培养基”1和HPB.LJR培
与于重的测定方法和装置见文献[2】。
养基”J。培养基高压灭菌115℃,30111in,35℃条件下
和转速120聊的空气浴摇床中培养。
收稿日期:20㈣.05
基盒项目:国家杰出青年科学基金(50l笛823);目家973重点
25
项目(∞0000264垃);哈工大基金(唧.^玎)2002
万方数据万方数据
2期 李永峰等:一株a训di啪属厌氧菌的分子鉴定与产氢特性
2结果与讨论
2.1 a憾l嘛喃Ⅻ厌氧菌的分离与筛选
利用“固相一液相一固相”培养基中的循环培养
分离纯化产氢细菌,一般进行5次左右的重复操作
即可获得纯菌菌落。用uⅥ.1培养基作为分离培养
的起始富集培养基。用m,B.LR培养基纯化培养产
氢细菌。共分离到90余株产氢细菌,将其中的l株
命名为R—mnqilyB3(以下简写为R33)。
菌株R33为革兰氏阳性,杆菌,长度为1.5—
2.Opm,宽度O,3~O.5岬,菌体周生鞭毛,鞭毛较长,
有芽孢,形成的菌落呈现白色或乳白色,20~30d可 图l菌株R。。岬驴3的透射电镜照片(30000x)
长成至直径为1.0—2.5Ⅱ蚰,菌落边缘整齐,圆形,光 0f蚰.m髓(300∞K)
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