微生物平板划线试验.ppt

平板划线实验实习 一、相关基础理论－－细菌的培养 一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。 1、培养基 在土壤、水、食品、空气以及人和动、植物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌需要不同的培养基进行培养。 1、培养基 培养基按其物理性状，分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基。 培养基按用途，分基础培养基、加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 2、常见培养基 基础培养基 肉浸液培养基：一般细菌都能在此培养基内生长 营养琼脂培养基：一般细菌培养使用 蛋白胨水培养基：靛基质实验 2、常见培养基 加富培养基 血琼脂培养基：可作为肺炎球菌、链球菌、葡萄球 菌、嗜血杆菌等的分离培养，还可用 于某些菌落的溶血作用 巧克力琼脂培养基：淋球菌及脑膜炎双球菌在此培养 基上生长较佳 2、常见培养基 选择培养基 亚硒酸盐增菌液：作为沙门氏菌属及某些志贺氏菌属 增菌用 伊红－美蓝琼脂：分离沙门氏及志贺氏菌属细菌 Baird-Parker培养基：用于金黄色葡萄球菌的培养分 离 2、常见培养基 鉴别培养基 三糖铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 双糖含铁琼脂：供鉴定肠道细菌用 葡萄糖枸橼酸盐琼脂：共作鉴别大肠杆菌与产气杆菌 之用 二、细菌的接种方法 将混合的细菌分离的方法有多种，平板划线法即是其中之一，该方法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，是单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的菌落以达到分离纯种的目的。 当细菌分离成纯种后，一般还可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为四种。 表3 常见的几种细菌的培养和基接种方法举例 1、斜面培养基接种法 常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。 1、斜面培养基接种法 步骤：（1）用记号笔在待接种的培养管上写明标记。 （2）点燃酒精灯。 （3）左手拇指、食指、中指及无名指分别握持菌 种与待接种的培养基管，使菌种管位于左侧， 斜面部均应向上。 （4）以右手拇指和食指捏持转动两管试管塞，以 便在接种是易于拔取。 （5）右手持接种环，在火焰上烧灼灭菌。 1、斜面培养基接种法 （6）以右手手掌及小指，小指及无名指分别拔取并 夹持两管试管塞，将两管管管口灭菌。 （7）将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管内，从 斜面上轻轻挑取少量菌苔退出菌种管。再伸进 待接种的培养基管，进行斜面培养基接种，从 斜面底部轻轻向顶端弯曲划线，不要触破培养 基表面。 1、斜面培养基接种法 （8）接种完毕，灭菌两试管的管口，塞好试管塞，并放至原来的位置上。重新烧灼接种环，灭菌后放回试管架上。接种好的试管放37℃温箱培养，18～24小时候观察生长情况。 1、斜面培养基接种法 2、液体培养基接种方法 可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊，有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另外还可以供测定细菌生化特性用。凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。 2、液体培养基接种方法 步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉