微生物学实验室菌种使用保存与管理方法研究.pdfVIP

of PreyMed J PubHealthand ·93· 公共卫生与预防医学2008年第19卷第4期 2008．V01．19，No．4 ·卫生管理· 微生物学实验室菌种使用保存与管理方法研究 张晖 黄萍 【中图分类号】R37 【文献标识码】B 【文章编号】1006．2483(2008)04-0093-03 快速、准确的微生物鉴定工作，对正确处理和控制公共 2严格控制，做好菌种的传代工作¨’ 卫生事件具有重要意义。因此，微生物检验室必须保藏一批 《中国药典》(2005年版)做出“菌株的传代次数不得超 形态、生物化学、血清学特性稳定的标准对照菌株。如果保 过5代(从菌株保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代)” 藏方法及管理不善，菌种优良特性便会退化、丧失，甚至导致 的明确规定。微生物菌种的传代保藏应按以下过程操作： 死亡，这就会影响菌种鉴定…。另外，疾控中心微生物实验 ①复溶菌种并接种，按菌种说明书要求复溶所转菌种并 室还要承接对辖区内各医院送检菌种鉴定，检测出来的阳性 转接于适当的增菌培养基内(F1)，经复壮后转接至平板上， 菌株的保管等，要求熟练掌握微生物菌种的使用、保藏、管理 室温培养一定时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代 技术规程。下面分述笔者在实际工作中的做法和体会。 (v2)。②鉴定菌种后制甘油冷冻管，经菌种特性鉴定后。挑 1制定菌种登记、复活管理程序B’ 选纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌 微生物检验室应制定出菌种的使用、保藏管理规程来规 落转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，保藏菌种为第2代 范菌种的来源、申购、使用、保管、接种传代、存储和领用等方 面的要求，确保菌种溯源性和稳定性。 管冷冻保存，将工作用菌(F3)以适当温度下培养适当时间 1．1做好菌种的来源登记确保溯源性清楚，每种菌种都 可用于试验。③取1支冷冻保存的F2代菌种转种于平板和 具有固定的编号，并要保存好菌种溯源性的原始记录。 斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保藏管第3代(F3) I．2菌种的接受从菌种保藏中心购买的原始菌种管是玻 斜面培养基，经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种 璃安瓿装的冻干粉剂，同时随菌种附有关资料。菌种购到实 (F3)。④将第3代菌种(F3)冷冻或低温保存，将生长、转种 验室后，应按安瓿的数量和名称和每一支安瓿的完整性，记 后的砣菌种经灭菌处理后丢弃。⑤当工作用菌种代数小于 录所购菌种的信息，如名称、数量和接收日期等。将安瓿贴 5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种， 好标签并储存于一20℃容器内，直到需要时使用。一般安瓿 如乃可直接转接为F4。⑥按上述程序操作，直至F4转为 冻干品可在5年之内使用。 F5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序，保藏和使 1．3菌种的复活原始菌种使用时，首先需复活冻干菌种。 用菌种。在这个方法中，菌种被分为传代用菌种和工作用菌 一般按以下步骤操作：①冷冻菌种的复活：用一无菌吸管吸 种两类，传代用菌种一般用甘油冷冻管法或试管熔封法保 取1—2ml适量的液体培养基滴加到安瓿中，轻轻旋转安 藏，工作用菌种一般用斜面低温保藏法保藏。 瓿，使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解，再将安 3采用多种方法．科学保藏常用菌种 瓿内的菌液转移至相应的培养基试管中，根据菌种类型将其 微生物菌种保藏的目的要求达到以下3点：①不变：保 放入适宜的培养条件下培养。浑浊说明菌种复活生长(如不 持原种形状。②不死：保持活力而不死。③不杂：保证纯培 浑浊。细菌应延长培养时间至7d以上，真菌应延长培养时 养，防止