- 1、本文档共88页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
ELISA影响因素及对策
河北医科大学第二医院检验科 李伟皓
简 介
• 1971年,瑞典学者Engvail和Perlmann、荷
兰学者Van Sch rs 分别报道以酶作为标记
物的固相免疫测定方法,称为酶联免疫吸
附试验。
• 1974年Voller 等在 《世界卫生组织公报》上
发表了ELISA方法检测血清中疟疾抗体的报
告,展示了ELISA在医学检验中广阔的应用
前景。
• 1978年在上海和北京ELISA讲习班。,
Voller 作了专题报告。促进了国内开展
ELISA的研究和应用。
• 1983年 《用ELISA检测乙型肝炎标志物》 的
发表 ,推动了国产ELISA试剂的大规模生产
和广泛的临床应用。
• ELISA 由于测定灵敏、特异和操作简便等诸
多优点,如试剂易于保存、结果判断较为
客观,是目前实验室检测抗原抗体最经济、
最普遍的试验诊断方法。广 泛用于各类医
学实验室。
• 多种感染性疾病的抗原和抗体、自身抗体、
肿瘤标志物、心血管疾病标志物、过敏原
等。
ELISA的原理
• 先将已知的抗体或抗原结合在某种固相载
体上,并保持其免疫活性。
• 测定时,将待检样本和酶标抗原或抗体按
不同步骤与固相载体表面吸附的抗体或抗
原发生反应。
ELISA的原理
• 用洗涤的方法洗去多余的分离抗原-抗体复
合物和游离成分。
• 然后加入酶的作用底物催化显色,根据颜
色做定性或定量分析,得出检测结果
• ELISA 法步骤包括标本的加样、温育、洗板、
显色、比色以及结果判断
• 虽然操作简单,但还是需要注意一些因素
的影响,试剂的选择、正确的操作、优良
的仪器都与检测结果密切相关。
ELISA的类型
酶联免疫吸附试验的主要技术类型有
夹心法、间接法、竞争法、捕获法等。
双抗体夹心法测抗原
此法适用于检验各种蛋白质等大分子抗原,例如
HBsAg、HBeAg、AFP 、hCG等。只要获得针对受
检抗原的异性抗体,就可用于包被固相载体和制备
酶结合物而建立此法。
双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:
1) 加受检标本,保温反应。标本中的抗原与固相抗体结合
,形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去其他未结合物质。
2) 加酶标抗体,保温反应。固相免疫复合物上的抗原与酶
标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上
带有的酶量与标本中受检抗原的量相关。
3) 加底物显色。固相上的酶催化底物成为有色产物。通过
比色,测知标本中抗原的量。
双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原,但
不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位
点夹心。
双抗原夹心法测抗体
反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进
行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间
接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗
体。
此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,
因此其敏感度相对高于间接法。乙肝标志物中抗
HBs 的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的
制备,应根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方
法。
间接法测抗体
本法主要用于对病原体抗体的检测而进行传染病的
诊断。间接法的优点是只要变换包被抗原就可利用
同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。
操作步骤如下:
1)加稀释的受检血清,保温反应。血清中的特异抗体
与固相抗原结合,形成固相抗原抗体复合物。经洗涤
后,固相载体上只留下特异性抗体,血清中的其他成
份在洗涤过程中被洗去。
2)加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以检测总抗体,但
一般多用酶标抗人IgG检测IgG抗体。固相免疫复合物
中的抗体与酶标抗体结合,间接地标记上酶。洗涤后
,固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。
3)加底物显色
竞争法测抗体
当抗原材料中的干扰物质不易除去,或不易得到足
够的纯化抗原时,可用此法检测特异性抗体。
包被物
您可能关注的文档
- 2011级数学与应用数学.ppt
- 2011年7月份投资策略报告.doc
- 2011年9月基金投资策略--股混仍可战略配置 风格均衡注重选股.pdf
- 2011年KPCB《移动互联网趋势报告》.pdf
- 2011年公共卫生实施方案.doc
- 2011年年度策略报告:在转型中寻找机会.pdf
- 2011艺动杯篮球比赛策划书.doc
- 2012年公历、农历、节日对照表.xls
- 2012年学校主要工作考评方案.xls
- 2012年中国动漫产业发展八大趋势.pdf
- 新高考通用备战2024年高考物理抢分秘籍05圆周运动水平面内转盘模型绳球模型杆球模型等中的临界问题学生版.doc
- 2025届高考语文一轮总复习第一部分现代文阅读板块一现代文阅读Ⅰ__信息类文本阅读复习任务三文本特征分析论述类科普访谈任务点一论述类文本特征分析命题角度一论证特色.doc
- 2024八年级英语下册Unit4Whydon'tyoutalktoyourparents周周小测新版人教新目标版.doc
- 2025版高考语文一轮总复习考点突破第四部分写作专题九文体与提分议论文突破点二如何巧妙论证.doc
- 2025版高考数学一轮总复习第10章计数原理概率随机变量及其分布第2讲二项式定理提能训练.doc
- 2025届高考地理一轮总复习素养提升第一模块自然地理第六章自然环境的整体性与差异性第17讲植被土壤与自然环境的整体性素养能力2土壤.doc
- 全国通用高考历史三轮冲刺过关回归教材重难点01中华文明的奠基与形成__先秦.doc
- 四川省绵阳市2024_2025学年高二生物上学期10月月考试题含解析.docx
- 2024七年级数学下学期期中检测新版华东师大版.doc
- 湖南省2024年普通高中学业水平合格性模拟考试高考生物仿真卷二.doc
文档评论(0)