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2017-08-25 发布于上海
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原代细胞鉴定技术.doc

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原代细胞鉴定技术一、形态学鉴定 1. 在倒置显微镜中直接观察活细胞的形态学特征 2. 细胞染色检查： a) 将无菌玻片置于细胞培养皿中，加细胞悬液后培养； b) 待细胞长满玻片后取出，用PBS清洗，之后放于载玻片上，待其自然干燥； c) 用PBS/甲醇（1:1）固定15分钟； d) 弃固定液，加合适的染色液染色； e) 染色完毕后用清水洗净，置于空气中干燥， f) 干燥后，用二甲苯透明，光学树脂封片后观察。二、免疫组织细胞化学鉴定 1. 将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片； 2. PBS清洗标本3次，各1 分钟； 3. 4%多聚甲醛固定15分钟； 4. 置于空气中干燥； 5. PBS清洗标本3次，各2 分钟； 6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分钟； 7. PBS清洗标本 3次各2分钟； 8. 3%H2O2孵育 15分钟； 9. DPBS清洗标本 3次各2 分钟； 10. 封闭血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液20分钟） 11. 一抗孵育，4℃ 过夜或37℃ 60 分钟； 12. PBS清洗标本3次各5 分钟； 13. 二抗工作液孵育（湿盒）37℃ 30 分钟； 14. PBS清洗标本3次各5 分钟； 15. C液（湿盒） 37℃ 30 分钟； 16. PBS清洗标本3次，各5 分钟； 17. 用显色液进行显色； 18. 蒸馏水洗涤2次1 分钟； 19. 苏木素复染1分钟； 20. 清水洗涤30分钟； 21. 光学树脂封片后观察。