日本沼虾VASA蛋白原核表达、抗体制备及免疫鉴定.pdf.pdfVIP

第 卷第 期 水产学报 年 月 文章编号 日本沼虾蛋白的原核表达抗体制备及其免疫鉴定 崔 峥 朱小玲 邱高峰 上海海洋大学农业部水产种质资源与利用重点开放实验室上海 上海市高校水产养殖学研究院上海海洋大学水产与生命学院上海 摘要 基因具有在性腺中特异表达的特点 在生殖细胞分化与发育过程中起重要作用 从日本沼虾精巢 中克隆了 基因的阅读框 连接到 载体 构建重组表达质 粒转化大肠杆菌 经诱导融合表达表达产物经分析表 明 融合蛋白主要以包涵体形式存在 分子量约 表达量约占包涵体总蛋白的 检测表明 融合蛋白可特异地被 标签抗体识别 用 纯化 后的融合蛋白免疫家兔制备获得多克隆抗体 显示该抗体效价达 免疫鉴定显示该抗体不仅能识别融合蛋白而且也能识别日本沼虾性腺粗提液中的内源性 蛋白 免疫组化进一步显示 蛋白主要分布在卵母细胞核周围和精原细胞质中 成熟精子中无信号暗示在日本沼虾生殖细胞发育分化过程中扮演重要角色 关键词 日本沼虾 蛋白 原核表达 多克隆抗体 免疫鉴定 中图分类号 文献标识码 基因是 基因家族的重要成员 和 中 国 对 虾 之一因其具有高度保守的 基因的全长 序列而得名 基因仅在生殖细胞中 序列并采用原位杂交的方法定位了 特异表达因此被作为分子标记广泛应用于配子发 在性腺发育中的分布我们研究组之前也克 生和原始生殖细胞的起源 迁移 分化等研究 隆了日本沼虾 基 因证实了 仅在生殖细胞中特异表达 蛋白具有依赖 的 解旋酶活性 在 但甲壳动物蛋白的相关研究至今在国内外均 细胞代谢中具有重要作用参与代谢的 未见报