HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程.ppt

HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程 HLA新等位基因的发现 HLA新等位基因的鉴定方法 NCBI数据上传的应用 IMGT数据上传的应用 HLA新等位基因发现的意义 思考 HLA新基因申报数据的要求是什么？ HLA新基因申报数据的流程是怎样的？ （思考后，请在接下来的内容中验证您的答案是否准确） HLA新基因申报数据的要求 HLA-I类基因：必须进行第2外显子、第3外显子的正反向测序 HLA-II类基因：必须进行第2外显子正反向的测序 最好能够获得全长序列，但并不是必要条件 如果新的序列差别只在内含子或其他非编码的基因上，必须获得该部分的全长序列 如果样本是杂合子，新等位基因序列的获得必须完成与第二个等位基因分离 新等位基因的序列必须是可重复的 在可能情况下，应该公布和提交新基因序列的具体描述 如果您想获知更多的信息，可以登陆以下网址 www.ebi.ac.uk/imgt/hla/subs/sub_guide.html HLA新基因申报数据的要求 上传信息填写要求 ①必须指定一个名字，一个姓 ②必须指定一个电话号码 ③必须指定一个电子邮件地址 ④必须指定一个对外发布你上传序列的具体时限 ⑤确定上传者是否为第一次上传序列，如果不是第一次上传此序列，需注明原因 上传信息填写要求 ⑥必须指定一个DNA序列及其长度 ⑦必须选择或输入一个有机体的名称 ⑧无论这个序列会不会在杂志上发表，你都必须提供一个 标题 ⑨ DNA序列的长度不得小于最小长度（10bp较少） HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程 HLA新等位基因的发现 HLA新等位基因的鉴定方法 NCBI数据上传的应用 IMGT数据上传的应用 HLA新等位基因发现的意义 网上复核比对 IMGT数据上传 HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程 北京市红十字血液中心HLA实验室 崔 爽 人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigen，HLA）是位于人类第6号染色体短臂上一组紧密连锁的基因群，是目前人体中最具有多态性的遗传系统，由三类基因组成，即Ⅰ类基因、Ⅱ类基因和Ⅲ类基因，可以作为一个遗传单位或单倍型（haplotype）而遗传给下一代，属共显性等位基因 本课将重点介绍HLA新等位基因的检测方法，鉴定方法以及HLA新等位基因的数据申报流程 课前导读 HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程 HLA新等位基因的发现 HLA新等位基因的鉴定方法 NCBI数据上传的应用 IMGT数据上传的应用 HLA新等位基因发现的意义 HLA新等位基因的发现 HLA新等位基因的鉴定方法 NCBI数据上传的应用 IMGT数据上传的应用 HLA新等位基因发现的意义 HLA新等位基因的发现、鉴定方法及申报流程 HLA新等位基因的发现 SSP检测方法 SSP检测方法的实验原理 SSP检测过程中HLA新基因的识别 RSSO检测方法 RSSO检测方法的实验原理 RSSO检测过程中HLA新基因的识别 SBT检测方法 SBT检测方法的实验原理 SBT检测过程中HLA新基因的识别 RSSO检测方法的实验原理 采用流式反向SSO技术，原理是PCR基因片段扩增后利用序列特异性寡核苷酸探针，通过杂交的方法进行扩增片段的分析鉴定。探针与PCR产物在一定条件下杂交具有高度的特异性，严格遵循碱基互补的原则。探针用生物素非放射性标记进行相应的标记物检测。流式细胞仪的激光束垂直照射在样品流上，不同颜色的磁珠在光束的照射下，产生散射光和激发荧光，根据这两种信号的接受分析判定结果 Luminex SSOP 格局图 RSSO检测过程中HLA新基因的识别 34号探针反应图 66号探针反应图 SSP检测方法的实验原理 HLA-基因位于第6对染色体短臂远端的一个狭窄区域内，由一群紧密连锁的基因组成，是人体内最为复杂的遗传多态性系统。PCR-SSP HLA基因分型的基本原理是根据HLA-I、II类基因核苷酸的碱基序列，设计出一系列顺序特异性引物，该引物既针对型特异性又针对等位基因特异性，采用高特异耐热DNA聚合酶，通过PCR扩增各等位基因的型别特异性DNA片段，扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳，根据其特异性电泳区带所在的位置，即可准确指定一个等位基因，判定HLA型别 进一步用PCR-SSP基因分型技术进行分析，也显示无法 解释的反应格局 。　 　　　 PCR-SSP电泳图 SSP检测过程中HLA新基因的识别 结果—PCR-SSP 　　　 　　　 SBT检测方法的实验原理 目的基因在含有热启动DNA聚合酶AmpliTaq Gold? 的PCR