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结核病快速诊断进展 国家结核病参比实验室 赵雁林 Zhaoyanlin@tb123.org 结核病实验室工作在结核病控制中的作用 诊断 （发现传染源） 治疗 （确定治疗方案） 疗效评价 结核病控制策略和措施的评估 Diagnosis of Pulmonary TB Relatedto Numbers of Tubercle Bacilli 细菌 – 让人们联想到什么? 疾病 传染性 流行性 食物腐败 在目前已知的细菌中有1%的细菌可以导致人患病 在目前已知的细菌中有4%的细菌可以导致植物得病 95%已知细菌不具有致病性 为什么要进行EQA 增加人员的责任心 推行标准化、规范化操作 确保实验室服务质量的提高 生物安全的需要 加强实验室网络、采集信息 痰涂片镜检EQA 培训的意义 强化EQA的理解，有利于积极推广 提高实验室服务质量 提高对结核病实验室工作的重视 逐步提高结核病防治人员特别是结核病实验室工作人员的地位 结核病实验室相关的流行病学理论 结核病的发病学和流行 冰山理论 水库理论 病因分析和疗效评价 核分枝杆菌在人体中的生活周期 结核分枝杆菌的生活周期 微生物和人类 我们如何知道特定的病原微生物致病? 如何推测特定病原体可以致病? Koch‘s 推测 病原体必须在每一例病例中都出现 病原体可以从宿主中分离并且可以在纯培养基中生长 当特定的病原体接种到健康机体时特定的疾病会发生 病原微生物可以在实验动物中恢复 分枝杆菌的发现历史 1590 年荷兰杨森父子发明了显微镜 19世纪末,显微镜技术、染色技术已应用于微生物检测,分枝杆菌的发现条件已成熟 在发现结核菌前,科霍已是一位在微生物学方面取得丰硕成果的学者. Robert Koch – 第一个证明细菌可以致病 1876 传染病的微生物病因学 病因学 - 疾病的病因 建立 “科学规则” 来确定微生物和疾病的病因和效应关系 Koch’s 原理 Koch确定了3个重要疾病的病因 1. 霍乱 (fecal-oral disease) Vibrio cholerae 2. 结核病 (pulmonary infection) Mycobacterium tuberculosis 3. 炭疽(sheep and cattle) Bacillus anthracis 结核病 光学显微镜的基本原理 为区分物体不同的两点,这两点的光学成像必须落在视网膜上不同的感光细胞上; 显微镜下,光线经过显微镜物镜折射成倒立放大的实像,然后经目镜折射成正立放大的虚像; 经显微镜放大后,人眼就可以区分物体不同的两点,以达到观察微小物体的目的; 由于光线衍射的原因,普通光学显微镜不能区别小于0.2微米的物体； 分辨率和对比度 人的肉眼不能看清小于0.1毫米的物体 普通光学显微镜不能区别小于0.2微米的物体 电子显微镜不能看清小于0.1纳米的物体 电子显微镜下的结核分枝杆菌 生理条件下细菌的表面往往带有大量负电荷 染色反应 Stains - salts composed of a positive and negative ion, one of which is colored (chromophore) 碱性染料 – 着色基团带正电荷 dye+ Cl- 酸性染料 – 着色基团带正电荷 Na+ dye- 分枝杆菌涂片镜检基本原理 １、待检标本中存在分枝杆菌，即受检者排菌 ２、分枝杆菌的特殊结构决定了染色方法： 　　　染色剂 细菌表面带负电荷,与碱性复红易于结合, 　　　　加热 加深分枝杆菌着色程度 　　　　脱色 为了易于镜检，应该使抗酸菌以外的所有物质近乎完全脱色 　　　　复染 提供一个良好的对比，隐去背景中残留的红色，但不掩盖抗酸菌。而且，复染既要使涂片的背景易于镜检时调焦，同时又不能太深以至分散太多注意力 结核菌感染及排出示意图 结核病 结核病 细胞壁 细胞膜 两种主要结构成分 双层磷脂　double layer of phospholipids 蛋白质　　proteins 细菌感染的诊断 实验室检查是临床诊断的必要环节 OUTLINE 细菌学诊断 显微镜检查术 培养 免疫学诊断 分子生物学诊断 Gen Probe 噬菌体检测方法 HPLC 其他 结核分枝杆菌的细菌学诊断 显微镜检查 Gram-染色 抗酸染色 Ziehl-Neelsen 荧光染色 Direct, e.g.